农业生物技术学报

作者：刘琦, 陈创伟, 刘思涵, 邵文华, 黄梦瑶, 于凡瑞, 郑海学, 张伟, 杨帆

单位：1 兰州大学 动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室/中国农业科学院 兰州兽医研究所,兰州 730000; 2 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,兰州 730046; 3 兰州大学第一临床医学院,兰州 730000

关键词：KLHL21,水疱性口炎病毒(VSV),慢病毒包装,过表达细胞系,Ⅰ型干扰素,

基金：甘肃省重大专项(22ZD6NA001); 兰州大学中央高校基本科研业务费专项资金(lzujbky-2025-it58); 国家生猪产业技术体系(CARS-35); 国家生猪技术创新中心项目(NCTIP-XD/C03)

KLHL21 (Kelch-like protein 21)属于Kelch基因家族,在哺乳动物体内参与介导蛋白间相互作用、蛋白质降解及信号传导等许多重要的生理过程。为了探索KLHL21基因对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus, VSV)增殖的影响,本研究采用慢病毒介导技术成功获得过表达KLHL21基因的HEK-293T/KLHL21细胞系,并比较VSV在该细胞系和野生型HEK-293T细胞系中的复制情况。首先,在HEK-293T细胞中共转入辅助质粒psPAX2和pMD2.G及新构建的重组质粒pLV-puro-3×Flag-KLHL21,以生产包装成功的慢病毒(Lentivirus)。随后,利用所得慢病毒侵染HEK-293T细胞,再利用嘌呤霉素筛选出阳性细胞系HEK-293T/KLHL21。Western blot法检测KLHL21过表达细胞系中VSV的蛋白丰度,间接免疫荧光试验检测VSV-GFP荧光信号,同时测定VSV病毒滴度。结果显示,相较于野生型细胞系,构建的细胞系明显抑制VSV增殖。通过qPCR检测发现,与野生型细胞相比,构建的细胞系在VSV感染后激活了Ⅰ型干扰素应答,进而导致其下游基因的表达水平大幅提升。研究证实,KLHL21基因过表达细胞系能够激活Ⅰ型干扰素信号通路,并有效抑制VSV增殖。本研究为进一步研究KLHL21的抗病毒机制提供理论依据和材料支撑。

来源：2026年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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