农业生物技术学报

作者：高婕妤, 丁柳, 孔维恒, 尤征合, 李云飞, 宗凯, 孙娟娟, 余华峥, 胡康棣, 韩芳, 曾德新, 余晓峰

单位：1 合肥海关技术中心/安徽省食品安全监测与品控重点实验室,合肥 230022; 2 中国海关科学技术研究中心,北京 100026; 3 合肥工业大学 食品与生物工程学院,合肥 230601

关键词：CRISPR/Cas9基因编辑作物,PCR与侧向层析流试纸条(PCR-LFS),灵敏度,特异性,快速可视化检测,

基金：国家重点研发计划(2023YFF0611500); 安徽省重点研究与开发计划(2022i01020001)

随着CRISPR/Cas9基因编辑技术在作物育种领域的深入应用,其在提升作物抗性、产量及品质方面展现出巨大潜力,但伴随而来的基因编辑成分检测需求也日益凸显。育种早期及特定场景下,含未剔除外源CRISPR/Cas9元件的作物样本仍大量存在,而现有检测技术存在灵敏度低、耗时久或依赖复杂设备等问题。针对CRISPR/Cas9基因编辑作物快速检测需求,本研究开发了一种基于PCR与侧向层析流试纸条(PCR with lateral flow strips, PCR-LFS)联用的高灵敏检测方法。通过设计Cas9特异性引物及优化扩增体系,结合胶体金标记试纸条,实现了目标基因的快速可视化检测。结果显示,该方法检测限为0.012% (质量分数),灵敏度达17.5 copies/μL,显著优于传统PCR毛细管凝胶电泳(0.1%)及荧光定量PCR (1.75×104 copies/μL);特异性实验中,可精准区分Cas9阳性番茄(Solanum lycopersicum)样本与非转基因作物,且无交叉反应。实际样品验证表明,PCR-LFS对1∶213梯度混合样本仍能有效检出,重复性与稳定性优异。相较于传统技术,该方法无需复杂设备,检测时间缩短至3 h,适用于现场快速筛查及口岸监管。未来可通过优化引物靶标及试纸条工艺,扩展至其他基因编辑元件检测。本研究为转基因作物精准监测提供技术支撑。

来源：2026年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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