农业生物技术学报

作者：聂瑞敏, 赵琬玥, 陈绍元, 胡云冲, 陈盛通, 陈龙清, 耿芳

单位：西南林业大学 园林园艺学院/国家林业和草原局西南风景园林工程技术研究中心/云南省功能性花卉资源及产业化技术工程中心,昆明 650224

关键词：山茶,花色,花香,qPCR,内参基因,表达分析,

基金：国家自然科学基金(32260416); 云南省教育厅科学研究基金项目(2022Y618)

随着山茶花(Camellia spp.)分子生物学研究的不断深入,筛选出适用于山茶花qPCR分析的内参基因至关重要。本研究选择了3个具有不同观赏价值的山茶花品种为实验材料,采用反转录PCR (RT-PCR)和qPCR技术检测转录延伸因子α (elongation factor-α, EF-1α)、甘油醛三磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)、肌动蛋白(Actin 7, ACT)、微管蛋白α (α-tubulin, TUA)、微管蛋白β (β-tubulin, TUB)、蛋白磷酸酶2C (protein phosphatase 2C, PP2C)和磷酸酶激活剂TIP41 (phosphatase activator TIP41, TIP41)等7个常见内参基因在山茶花不同花发育时期和不同组织中的特异性和表达水平,利用ΔCt、geNorm、NormFinder和BestKeeper等程序分析候选基因的稳定性,并使用RefFinder进行综合评价,筛选出适合于山茶花qPCR的内参基因,并通过花色和花香生物合成关键基因对内参基因的稳定性进行验证。结果显示,EF-1α的平均表达量高于其他候选内参基因,ΔCt、NormFinder和BestKeeper的分析结果均表明EF-1α在山茶花的不同组织和花发育时期中稳定性最高,而geNorm的结果显示GAPDH和TIP41的稳定性更好,此外,所有程序的结果均显示ACT是最不稳定的内参基因。在RefFinder的综合评价基础上,以花色基因查尔酮合成酶(chalcone synthase, CrCHS)、查尔酮异构酶(chalcone isomerase, CrCHI)和花香基因1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase, ChDXS1)、1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate reductoisomerase, ChDXR)的表达模式分析对EF-1α和ACT进行验证,结果证明,EF-1α具有较好的稳定性,可被选择为山茶花色和花香研究中的内参基因。本研究为进一步研究山茶花色和花香形成过程相关功能基因提供理论基础和技术支持。

来源：2026年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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