农业生物技术学报

作者：曾晴勤, 李如松, 李红英, 王欣乐, 王莹, 夏天奇, 王璞, 时恒枝, 张路平, 郑亚东, 赵秀玲, 宋厚辉

单位：1 宁波海关技术中心/宁波市口岸生物与食品安全检测重点实验室,宁波 315000; 2 四川省江油市动物疫病预防控制中心,江油 621700; 3 浙江农林大学 动物科技学院&动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室,杭州 311300; 4 河北医科大学第一医院 心脏外科,石家庄 050031; 5 中国疾病预防控制中心 寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)/国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室/世界卫生组织热带病合作中心/传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室,上海 200025

关键词：伊氏锥虫病,马,核苷三磷酸二磷酸水解酶(NTPDase),ELISA,

基金：海关总署科研计划项目(2022HK040); 宁波中盛产品检测有限公司技术开发项目(2023ZS003); 上海市加强公共卫生体系建设三年行动计划(2023-2025年)重点学科项目(GWVI-11.1-12); 浙江农林大学科研发展基金项目(2022LFR035)

伊氏锥虫病通常称为苏拉(Surra),是由伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)寄生于马(Equus)、骆驼(Camelus)等动物的血液而引起的一种原虫病。精准诊断是有效防控伊氏锥虫病的关键环节,但是现有诊断技术存在假阴性率高、价格昂贵等缺点。本研究在体外重组表达伊氏锥虫的核苷三磷酸二磷酸水解酶(nucleoside triphosphate diphosphohydrolase, TeNTPDase),通过优化抗原包被浓度及其条件、血清稀释度及其孵育条件、酶标二抗稀释度及其孵育条件等反应参数,建立基于TeNTPDase的马锥虫病间接ELISA抗体检测方法。结果显示,重组TeNTPDase主要以包涵体形式表达,大小约为60 kD;建立的ELISA方法在不同批次包被抗原中的变异系数为3.50%~7.32%,均小于10%,在37 ℃不同孵育时间内的变异系数为3.89%~14.45%,小于15%,表明所建立的方法具有较好的重复性和稳定性;利用建立的ELISA方法检测马临床血清样品,结果显示,伊氏锥虫病的阳性率为5.83% (7/120),与商品化ELISA试剂盒的阳性率(3.33%)没有显著差异,符合率为92.5% (111/120)。本研究为马锥虫病诊断和有效防控提供技术支持。

来源：2025年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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