农业生物技术学报

作者：刘芯怡, 李丹, 秦刚, 陈俊贞, 付强, 史慧君

单位：1 新疆农业大学 动物医学学院,乌鲁木齐 830052; 2 新疆草食动物新药研究与创制重点实验室,乌鲁木齐 830052; 3 天康生物制药有限公司,乌鲁木齐 830032; 4 新疆巴楚县畜牧兽医站,巴楚 843800; 5 中国农业科学院 西部农业研究中心,昌吉 831100

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV),微滴式数字PCR (ddPCR),实时荧光定量PCR (qPCR),灵敏性,特异性,重复性,

基金：新疆维吾尔自治区天山英才项目(2022TSYCCX0049); 新疆维吾尔自治区杰出青年基金(2022D01E15); 新疆现代农业产业技术体系(XJARS-XM-08); 国家级大学生创新训练项目(202110758005)

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)是引起犊牛(Bos sp.)病毒性腹泻的主要病原之一,导致犊牛免疫力降低,患病率和死亡率升高。目前对BVDV常用的检测方法存在灵敏度较低、容易出现假阳性等状况。本研究基于微滴式数字PCR (droplet digital PCR, ddPCR)技术,建立BVDV精准检测技术。首先针对BVDV 5' UTR基因保守序列区域设计引物和探针,合成BVDV 5' UTR基因并构建质粒标准品。使用BVDV质粒标准品分别建立实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR, qPCR)和ddPCR检测方法,并优化其反应参数和条件,分析其灵敏度、特异性和重复性,并进行了临床应用。结果显示,本研究建立的qPCR方法中,最佳引物和探针浓度分别为300和500 nmol/L,标准曲线呈良好的线性关系,最低检测下限为1×104 copies/μL,具有良好的特异性和重复性。建立的ddPCR方法中,最低检测下限为0.64 copies/μL,比qPCR灵敏性高15 625倍,该方法具有良好的特异性和重复性。临床检测了82份样品,ddPCR检出率为15.58%,qPCR检出率为14.63%。本研究建立的ddPCR方法比qPCR方法更加灵敏、高效、特异且重复性良好,为BVDV鉴别诊断提供了技术支持。

来源：2025年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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