农业生物技术学报

作者：赵薇, 张灿, 付康, 马宁, 葛家成, 孙凯, 俞晓平

单位：1 中国计量大学 计量测试与仪器学院,杭州 310018;2 中国计量大学 生命科学学院 国家市场监督管理总局重点实验室(微生物计量检测与生物制品质量安全),杭州 310018;3 海利尔药业集团股份有限公司,青岛 266109;

关键词：辣椒斑驳病毒,酵母体内重组,基因组,侵染性克隆,反向遗传学,

基金：国家自然科学基金面上项目(32472649); 浙江省属高校基本科研业务费(2022YW04)

辣椒斑驳病毒(Pepper mottle virus, PepMoV)是马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的成员,能够侵染辣椒(Capsicum annuum)、番茄(Solanum lycopersicum)等重要茄科作物。本研究利用小RNA测序技术,在浙江省杭州市的辣椒样品中成功检测到PepMoV。通过RT-PCR技术扩增其基因组,获得长度为9 640个核苷酸的全长基因组序列。为了克服PepMoV侵染性克隆构建过程中面临的大片段拼接困难及基因组含有大肠杆菌(Escherichia coli)致死基因等问题,采用酵母(Saccharomyces cerevisiae)体内同源重组技术,将5个DNA片段在酵母中一步组装成PepMoV病毒的全长侵染性克隆。重要的是,酵母质粒可以直接转化入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)并进行浸润接种,从而避免了大肠杆菌克隆步骤及其相关的毒性问题。结果表明,与传统的酶切连接方法相比,该构建策略将所需时间从数月缩短至仅1周,获得的PepMoV-HZ病毒侵染性克隆能够有效感染本氏烟草(Nicotiana benthamiana),并且发病症状明显。PepMoV病毒侵染性克隆的成功构建不仅为建立该病毒的快速检测方法提供了阳性样品对照,而且为深入研究该病毒的基因功能及其与寄主的相互作用机制提供了重要的实验材料和手段。

来源：2025年第2期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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