农业生物技术学报

作者：刘凯, 赵云海, 何肖肖, 马海云, 王青, 刘玉东, 包世俊

单位：甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070

关键词：滑液囊支原体(MS),DnaK蛋白,单克隆抗体,抗原表位鉴定,

基金：国家自然科学基金(32072863)

热休克蛋白(DnaK)是生物在受不利因素影响下产生的具有高度保守性的应激蛋白,具有载体和佐剂双重作用,然而目前对滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae, MS) DnaK蛋白研究较少。本研究为制备MS DnaK蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb)并对其抗原表位进行初步鉴定,构建重组质粒进行重组蛋白表达,并纯化出滑液囊支原体重组蛋白DnaK (rMSDnaK 蛋白),以rMSDnaK蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)。选择抗体水平高的小鼠,分离其脾脏,将脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法和间接ELISA法筛选出状态良好的阳性杂交瘤细胞,将其注射至昆明鼠腹腔后收集并纯化腹水。经SDS-PAGE鉴定,rMSDnaK成功表达。采用间接ELISA法筛选出1株可分泌抗DnaK抗体且稳定性良好的杂交瘤细胞株,命名为6G6。对MAb 6G6亚型进行鉴定,结果为IgG3亚类。纯化后的MAb经间接ELISA法测定效价为1:102 400。Western blot结果显示,MAb 6G6仅与rMSDnaK蛋白发生反应。间接免疫荧光结果显示,MAb 6G6仅与MS发生荧光反应。Western blot结果证明,制备的截短体MS DnaKΔ3-3能够与rMSDnaK蛋白反应,证明单克隆抗体识别的抗原表位区域是C端506~596位氨基酸。本研究成功制备出抗MS DnaK单克隆抗体并对其进行抗原表位鉴定,为后续建立检测MS的双抗夹心ELISA法提供生物材料。

来源：2025年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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