农业生物技术学报

作者：刘耿, 裴梦源, 仇真毓, 唐甜, 何婷, 乔自林, 王家敏, 刘振斌

单位：1 西北民族大学 甘肃省动物细胞技术创新中心,兰州 730030; 2 西北民族大学 细胞基质疫苗关键技术与产业化教育部工程研究中心,兰州 730030; 3 西北民族大学 生物医学研究中心/生物工程与技术国家民委重点实验室,兰州 730030

关键词：Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞,无成瘤性,悬浮细胞株,蛋白质组学,基因工程疫苗细胞系,

基金：国家自然科学基金(32160164); 中央高校基本科研业务费项目(31920230001; 31920240077); 甘肃省科技计划(22JR11RA239)

Madin-Darby犬(Canis lupus familiaris)肾(Madin-Darby canine kidney, MDCK)细胞作为流感疫苗生产的基质细胞,具有标准化、高产量的优点,但是其贴壁生长阻碍了生产规模的扩大,其成瘤性阻碍了MDCK基质疫苗的推广。本研究通过单克隆筛选和悬浮驯化成功获得1株MDCK无成瘤性悬浮细胞株XF06。以XF06和成瘤性悬浮细胞株XF04进行裸鼠(Mus musculous)荷瘤实验,将1×107个细胞皮下注射到无胸腺裸鼠的背部,每组10只;以人(Homo sapiens)宫颈癌细胞系(Hela)(有成瘤性)作为阳性对照,以人胚肺成纤维细胞(MRC5)(无成瘤性)作为阴性对照。结果显示,筛选的细胞株XF06在裸鼠体内未形成肿瘤。利用数据非依赖性采集(data-independent acquisition, DIA)蛋白组学技术比较XF04和XF06的蛋白表达差异,筛选细胞成瘤相关基因,并进行基因和蛋白表达水平的验证。结果显示,4个蛋白(含杆状病毒IAP重复序列蛋白5 (baculoviral IAP repeat containing 5, BIRC5)、肌动蛋白结合蛋白1 (fascin actin-bundling protein 1, FSCN1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1 (insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 1, IGF2BP1)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白 2 (TNF alpha induced protein 2, TNFAIP2))在无成瘤性的XF06细胞中的基因和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),可能参与MDCK细胞成瘤的调控。本研究为利用基因编辑技术抑制细胞成瘤的靶基因筛选提供参考依据。

来源：2025年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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