农业生物技术学报

作者：白文凯, 刘佩雯, 陈艳, 王安, 方博, 杨庭基, 张全伟, 王琪, 赵兴绪, 董伟韬, 张勇

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院, 兰州 730070; 2 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室, 兰州 730070; 3 甘肃农业大学 生命科学技术学院, 兰州 730070

关键词：奶牛,肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基3 (ARPC3),原核表达,抗体制备,乳房炎,

基金：甘肃省教育厅青年博士支持项目(2024QB-064);甘肃省科技厅青年科技基金(24JRRA65);国家自然科学基金(U21A20262)

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基3 (actin associated protein 2/3 complex subunit 3, ARPC3)是肌动蛋白骨架组织的重要组成部分,对细菌的侵袭、炎症发展和细胞凋亡具有重要作用。为了研究ARPC3蛋白对奶牛(Bos taurus)乳房炎的作用,本研究利用在线软件对奶牛ARPC3进行生物学特性分析,构建pQE-80L-ARPC3重组质粒,通过原核表达系统诱导表达蛋白,并对异丙基-β-D-硫代半乳糖(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside, IPTG)浓度和诱导时间进行优化。将表达的蛋白经亲和层析法纯化,通过SDS-PAGE和质谱鉴定后免疫新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)以制备多克隆抗体,采用ELISA和Western blot分别鉴定多克隆抗体的效价和特异性。结果显示,成功构建了重组质粒pQE-80L-ARPC3,最佳诱导表达条件为IPTG浓度1 mmol/L诱导8 h,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白(大小约为20.5 kD)。ARPC3多克隆抗体血清效价为1∶128 000。天然蛋白Western blot鉴定表明,ARPC3多克隆抗体血清能特异性识别目的蛋白和乳腺组织中的ARPC3。免疫组织化学(immunohistochemical, IHC)结果表明,ARPC3蛋白的表达与相关凋亡蛋白的表达呈正相关,所制备多克隆抗体能很好地应用于奶牛乳房炎的检测。本研究成功制备出特异性良好的奶牛ARPC3多克隆抗体,可以用于奶牛乳房炎快速检测新技术的建立及应用。

来源：2025年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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