农业生物技术学报

作者：史倩倩, 陈金炫, 陈恒耀, 寇少康, 楚红燕, 张磊, 潘世源, 张二芹, 张改平

单位：1 河南农业大学 动物医学院/国家动物免疫学国际联合研究中心, 郑州 450046; 2 龙湖现代免疫实验室, 郑州 450046; 3 北京大学 现代农学院, 北京 100871; 4 河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室, 郑州 450002

关键词：新城疫病毒(NDV),血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN),水稻细胞,纯化,免疫试验,

基金：河南省科技攻关项目(222102110210);河南省重大科技专项(221100110600)

新城疫是新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,其中基因Ⅶ型病毒流行广泛。血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase protein, HN)是病毒的结构蛋白,也是宿主细胞受体识别和促进细胞膜融合的重要免疫原性蛋白。水稻(Oryza sativa)细胞是生产生物药物的一个有前景的经济有效的生物反应器平台,水稻α-淀粉酶3D系统包含一个诱导启动子,在糖饥饿条件下具有很强的激活活性,可以高效、高水平地表达外源蛋白。本研究从NCBI上筛选NDV基因Ⅶ型HN氨基酸序列,根据水稻密码子偏爱性对HN基因进行优化,构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HN;利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将HN基因转入到水稻愈伤组织中,经潮霉素筛选和PCR鉴定阳性愈伤,在阳性愈伤中诱导表达HN蛋白,通过Western blot鉴定。利用SP阳离子层析和Hiloard 75 pg凝胶层析纯化HN蛋白,并以5和10 μg剂量分别与Al(OH)3和50V佐剂乳化,免疫6周龄BALB/c雌鼠(Mus musculus),通过血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)实验和中和实验(neutralizing test, NT)检测抗体的效价,并检测二次免疫6周后白细胞介素-2 (interleukin-2, IL-2)水平。结果显示,成功构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HN,并鉴定出85个阳性愈伤,HN蛋白在水稻细胞中成功表达和纯化。免疫小鼠后,除PBS组,每组产生的抗体水平达到免疫保护效果(HI≥24),能够产生中和抗体,具有病毒中和作用。本研究在水稻细胞中表达了新城疫HN蛋白,建立了HN蛋白纯化方法,低剂量HN蛋白免疫动物后,具有良好的免疫效果,为今后新城疫亚单位疫苗的研究提供了参考依据。

来源：2025年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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