农业生物技术学报

作者：刘玉东, 邵钰, 杨永宁, 王青, 黄冬, 何肖肖, 王丽, 马海云, 赵云海, 张志雄, 邢小勇, 包世俊

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;2 青海农牧科技职业学院,西宁 812100

关键词：马麝出血症病毒(McHDV),VP60蛋白,重组杆状病毒,病毒样颗粒(VLPs),

基金：甘肃省优秀博士生资助项目(23JRRA1445); 甘肃省重点研发计划–农业类(20YF3NA015); 甘肃农业大学公招博士科研启动基金(GAU-KYQD-2023-25); 国家自然科学基金(32072863)

马麝病毒性出血症(Moschus chrysogaster viral hemorrhagic disease, McVHD)是马麝出血症病毒(Moschus chrysogaster hemorrhagic disease virus, McHDV)引起的一种马麝急性、高度致死性传染病,目前没有关于该病的预防及治疗措施。为了研制安全有效的McVHD疫苗,本研究通过PCR方法扩增McHDV VP60全基因,并将VP60基因插入载体pFastBac1中,然后转化到含有Bacmid质粒的DH10Bac感受态细胞,构建含VP60基因的重组杆粒rBacmid-McHDV-VP60,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-McHDV-VP60,通过Westerm blot、SDS-PAGE试验对重组杆状病毒rBac-McHDV-VP60进行目的蛋白的表达鉴定;通过透射电镜及红细胞凝集试验对VP60蛋白是否形成病毒样颗粒和血凝活性进行鉴定。结果表明,成功构建了重组杆粒rBacmid-McHDV-VP60并获得重组杆状病毒rBac-McHDV-VP60。SDS-PAGE及Western blot鉴定显示,重组杆状病毒感染Sf9细胞表达出大小约63 kD的可溶性McHDV-VP60蛋白。透射电镜观察显示,McHDV-VP60蛋白可自组装成病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs),大小约为35 nm,呈球形结构,表面光滑。红细胞凝集试验显示,重组McHDV-VP60蛋白溶液对1%人(Homo sapiens)的O型红细胞的凝集价为1∶215。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统,成功构建了表达McHDV-VP60蛋白的重组杆状病毒,McHDV-VP60蛋白可自组装成VLPs,本研究为McVHD病毒样颗粒疫苗的研制提供了技术支持。

来源：2025年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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