农业生物技术学报

作者：扈艺凡, 魏博崛, 张艺榕, 李长红, 陈炯

单位：宁波大学 海洋学院 生物化学与分子生物学实验室,宁波 315832

关键词：肝表达抗菌肽-2 (LEAP-2),绿鳍马面鲀,溶藻弧菌,基因表达,抗菌活性,

基金：国家自然科学基金(32173004); 浙江省自然科学基金(LY21C190003); 宁波市自然科学基金(2023J110)

肝表达抗菌肽2 (liver-expressed antimicrobial peptide 2, LEAP-2)是一种阳离子抗菌肽,是动物先天免疫的重要组分。本研究通过转录组测序获得绿鳍马面鲀(Thamnaconus modestus) TmLEAP-2A和TmLEAP-2C的cDNA序列,序列分析显示,二者分别编码103和79个氨基酸,分子量分别为11.18和9.14 kD;TmLEAP-2A和TmLEAP-2C分别与大黄鱼(Larimichthys crocea)的LEAP-2A、LEAP-2C同源性最高,分别为72.8%和62.5%。系统进化树分析表明,TmLEAP-2A和TmLEAP-2C分别与大黄鱼LEAP-2A和LEAP-2C进化相关性最高。qPCR分析表明,TmLEAP-2A和TmLEAP-2C mRNA都主要在肝中表达,并且溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)感染诱导了二者在肝中的表达。TmLEAP-2A成熟肽(TmLEAP-2AP46)仅对创伤弧菌(V. vulnificus)有抑制活性,TmLEAP-2C成熟肽(TmLEAP-2CP39)对溶藻弧菌和创伤弧菌均有抑制活性。进一步研究发现,TmLEAP-2CP39对溶藻弧菌的基因组DNA有水解作用,并且溶藻弧菌与TmLEAP-2CP39孵育后,对碘化吡啶的摄取增强,活细胞比例大幅下降。扫描电镜(scanning electron microscopy, SEM)观察结果显示,TmLEAP-2CP39孵育后溶藻弧菌形态不完整,细胞膜表面出现皱缩,大部分菌体表面甚至有凹陷或孔洞形成;透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)观察结果显示,TmLEAP-2CP39孵育后溶藻弧菌细胞膜不仅明显皱缩,而且大部分菌体膜质发生分离,细胞膜破裂,内容物外泄。以上结果说明,TmLEAP-2A和TmLEAP-2C与溶藻弧菌感染密切相关,但仅TmLEAP-2C在体外对溶藻弧菌有抑菌活性,且可通过破坏溶藻弧菌细胞膜的完整性和水解基因组DNA (genomic DNA, gDNA),来发挥直接的抗菌作用。研究结果不仅丰富了鱼类抗菌肽知识,也为鱼类抗菌肽类药物的研发提供了理论基础。

来源：2025年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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