农业生物技术学报

作者：刘乃儒, 张西, 张翠, 董捷, 毛维嘉, 王亚琴, 周雪平, 傅帅, 吴建祥

单位：浙江大学 生物技术研究所 水稻生物育种全国重点实验室/浙江省作物病虫生物学与生态调控重点实验室, 杭州 310058

关键词：辣椒轻斑驳病毒(PMMoV),单克隆抗体,斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),胶体金免疫层析试纸条(CGICS),

基金：国家重点研发计划(2022YFD1401200);浙江省基础公益研究计划(LTGN24C140002)

辣椒轻斑驳病毒(Peppermildmottlevirus,PMMoV)对全球辣椒(Capsicumannuum)产业构成了严重威胁,而开发灵敏实用的病毒检测技术是防控该病毒病的关键。本研究以提纯的PMMoV粒子为免疫原,通过BALB/c小鼠(Musmusculus)免疫、细胞融合、杂交瘤细胞筛选、抗体选择、连续细胞亚克隆和单克隆抗体腹水制备等过程,成功制备出6株能特异性且灵敏地识别PMMoV的单克隆抗体,分别命名为15A3、15G7、17D1、11E1、6A10和3B2。利用这些单克隆抗体,本研究建立了检测PMMoV的斑点酶联免疫吸附试验(dotenzyme-linkedimmunosorbentassay,Dot-ELISA)和胶体金免疫层析试纸条(colloidalgoldimmunochromatographicstrip,CGICS)两种血清学技术。Dot-ELISA和CGICS均能特异且广谱地检测PMMoV的不同分离物,而对于烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucum-bergreenmottlemosaicvirus,CGMMV)、番茄褐色皱纹果病毒(Tomatobrownrugosefruitvirus,ToBRFV)、番茄花叶病毒(Tomatomosaicvirus,ToMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)和健康辣椒植物样本均呈阴性反应。此外,Dot-ELISA和CGICS技术在检测病叶匀浆液的灵敏度分别达到了1∶25600和1∶204800倍稀释(W/V,g/mL),且灵敏度分别为常规RT-PCR方法的2倍和16倍。进一步的田间样品检测结果显示,两种血清学检测技术的检测结果与RT-PCR检测结果的一致性达到100%,表明所建立的两种血清学技术可以准确、广谱且灵敏地用于PMMoV的快速检测。本研究为PMMoV的检测诊断及其科学防控提供了重要的技术支持。

来源：2025年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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