农业生物技术学报

作者：李金岚, 孙诗雨, 何晓菲, 张力懿, 林亚秋, 刘伟, 邢佳妮

单位：1 西南民族大学 畜牧兽医学院, 成都 610041; 2 西南民族大学 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室, 成都 610041; 3 四川农业大学 动物科技学院, 成都 611130

关键词：山羊,磷酸二酯酶4B(PDE4B),表达特性,肌内前体脂肪细胞,脂质沉积调控,

基金：国家自然科学基金面上项目(32372857);四川省青年科技创新研究团队(2022JDTD0030);中央高校基本科研业务费专项基金项目(ZYN2024015)

山羊(Caprahircus)肌内脂肪(intramuscularfat,IMF)是影响羊肉品质如风味、多汁性等的关键因素。本研究聚焦于山羊磷酸二酯酶4B(phosphodiesterases4B,PDE4B)基因克隆与功能解析,旨在阐明其对山羊肌内前体脂肪细胞分化的调控机制。本研究以简州大耳羊肌内前体脂肪细胞为研究对象,利用RT-PCR技术扩增目标基因片段,结合在线生物信息学工具对其序列进行分析。运用qPCR技术对山羊多组织样本及不同发育阶段肌内前体脂肪细胞中PDE4B基因的mRNA相对表达量进行系统性定量分析。利用基因重组方法构建pEGFP-N1-PDE4B过表达载体,转染至山羊肌内前体脂肪细胞,通过油红O染色和qPCR等手段阐明过表达PDE4B对肌内前体脂肪细胞分化、脂滴积聚、甘油三酯合成及分解标志基因表达量的影响。结果显示,克隆获得山羊PDE4B基因片段全长1815bp,其中包括编码区1629bp,共编码542个氨基酸。定量分析结果显示,山羊肺脏组织中PDE4B基因表达丰度极显著高于其他受检组织(P<0.01);在肌内前体脂肪细胞诱导分化48h后,该基因mRNA表达水平达到峰值(P<0.01)。油红O染色及定量结果显示,过表达PDE4B基因后脂滴聚集显著增多(P<0.05),且过表达PDE4B极显著上调脂肪细胞分化标志基因CCAAT-增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancerbindingproteinα,C/EBPα)、C/EBPβ及甘油三酯合成标志基因激活蛋白2(Activatorprotein2,AP2)和脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase,FASN)的表达(P<0.01),极显著下调甘油三酯分解标志基因甘油三酯水解酶(adiposetriglyceridelipase,ATGL)、激素敏感脂酶(hormone-sensitivelipase,HSL)和脂肪酶(lipoproteinlipase,LPL)的表达(P<0.01)。本研究证实PDE4B基因可能通过促进C/EBPα、C/EBPβ、AP2及FASN等脂肪生成标志基因的表达,正向调控山羊肌内前体脂肪细胞分化进程。本研究为阐明PDE4B介导脂质沉积的分子机制提供了关键实验依据。

来源：2025年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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