农业生物技术学报

作者：李佳鑫, 高风英, 董浚键, 孙成飞, 张赫桐, 朱芷琳, 王庆奎

单位：1 天津农学院 水产学院,天津 300380;2 中国水产科学研究院 珠江水产研究所/农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广州 510380

关键词：大口黑鲈,第10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN),基因克隆,组织表达,亚细胞定位,双荧光素酶活性分析,

基金：中国水产科学研究院基本科研业务费(2023TD95); 现代农业产业技术体系专项资金(CARS-46)

第10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)是迄今发现的第1个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,在多种信号通路中发挥重要作用。为了阐明鱼类PTEN在核因子κB (nuclear factor kappa-B, NF-κB)、干扰素(interferon, IFN)和激活蛋白-1 (activator protein-1, AP-1)信号通路中的调控作用,本研究利用逆转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法从大口黑鲈(Micropterus salmoides)中扩增并克隆了PTEN基因ORF序列,利用qPCR检测了不同病原体相关分子模式—诺卡氏菌(Nocardia seriolae)、大口黑鲈蛙病毒(Largemouth bass virus, LMBV)及聚胞肌酸Poly I:C对大口黑鲈PTEN基因表达水平变化的影响。通过构建真核表达质粒pCMV-Flag-PTEN对大口黑鲈PTEN进行亚细胞定位以及过表达对NF-κB、AP-1、IFN启动子荧光素酶活性的激活作用进行研究。蛋白质序列分析显示,大口黑鲈PTEN编码了439个氨基酸,其中包含1个PTPc结构域和1个PTEN_C2结构域,在系统发育树中与其他硬骨鱼类PTEN家族聚为一支。qPCR检测发现PTEN在健康的大口黑鲈多种组织中广泛表达,且在脾脏和鳃中高表达。人工感染诺卡氏菌可引起PTEN基因表达量显著下降;注射LMBV、Poly I:C后,PTEN基因表达量呈先下降后上升或先上升后下降的表达趋势。亚细胞定位结果显示,大口黑鲈PTEN在HEK-293T细胞的细胞质和细胞核中分布。双荧光素酶活性分析发现过表达pCMV-Flag-PTEN可以增强AP-1和抑制NF-κB、IFN启动子荧光素酶活性。以上研究表明,大口黑鲈PTEN可以通过激活AP-1和抑制NF-κB、IFN信号通路,在机体抗细菌和抗病毒先天免疫应答中发挥重要的调控作用。本研究为阐明大口黑鲈抗病免疫应答机制的研究提供基础资料,为抗菌疫苗开发、抗病品种(系)的选育提供理论基础。

来源：2025年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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