农业生物技术学报

作者：马秀玲, 陈莹, 林嘉鹏, 汪立芹, 古丽米热·阿布都热依木, 吴向利, 黄俊成, 王旭光, 吴阳升

单位：1 农业农村部草食家畜遗传育种与繁殖重点实验室,乌鲁木齐 830011; 2 新疆动物生物技术重点实验室,乌鲁木齐 830011; 3 新疆农业大学 动物科学学院,乌鲁木齐 830052

关键词：电转,基因编辑,FecB基因,绵羊胚胎,点突变,同源引导修复(HDR),

基金：新疆维吾尔自治区重大科技专项(2023A02011-2; 2023A02011-1); 新疆“三农”骨干人才培养项目(2022SNGGGCC036); 科技创新2030-农业生物育种重大项目(2022ZD0401303); 新疆维吾尔自治区重点实验室开放课题(2022D04001)

FecB (fecundity booroola)基因是绵羊(Ovis aries)多胎主效基因之一,是骨形态发生蛋白受体1B(bone morphogenetic protein receptor 1B, BMPR1B)基因编码区单碱基突变形式,利用基因编辑技术可生产具有FecB基因的绵羊。基因编辑羊的生产通常是将基因编辑材料显微注射至受精卵,再移植受体而获得后代。电转是一种简便易行的将基因编辑材料导入细胞的常用方法。本研究旨在建立一种基于电转的绵羊胚胎FecB基因编辑方法。利用Cas9核酸酶、小向导RNA (small guide RNA, sgRNA)、单链DNA (single-stranded DNA, ssODN)和抑制剂Scr7等基因编辑材料,比较不同电压、不同时长以及不同受精后时间对绵羊胚胎发育和编辑效率的影响。结果显示,电转参数在电压40 V,时长2 ms,重复5次,受精后4~6 h时,胚胎具有较高的成活率和编辑效率。总编辑效率达到88%,其中点突变胚胎比例可达60%。移植电转胚胎,并获得3只FecB基因编辑羔羊。综上所述,本研究建立了一种简单、经济、高效的绵羊受精卵电转基因编辑方法,为加快绵羊基因编辑育种的推广应用和提高繁殖性能提供技术支撑。

来源：2025年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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