农业生物技术学报

作者：张慧, 宋丽, 周豫, 何国宇, 王悦, 李钱峰, 潘志明, 刘巧泉, 焦新安

单位：1 扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心/教育部 农业与农产品安全国际合作联合实验室,扬州 225009; 2 扬州大学 植物功能基因组学教育部重点实验室/江苏省作物基因组学和分子育种重点实验室,扬州 225009

关键词：新型冠状病毒,受体结合域(RBD)蛋白,转基因水稻,稳定表达,糖基化,

基金：国家重点研发计划(2022YFC2604200); 江苏省重点研发计划(现代农业)重点项目(BE2021331); 高等学校学科创新引智计划(D18007); 江苏省高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)

自2019年以来,尽管许多商用疫苗已快速获批,新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)仍在全球范围内传播并发生变异,SARS-CoV-2表面刺突蛋白的受体结合域(receptor binding domain, RBD)是新冠疫苗的主要靶点。为了获得成本低廉、安全、易于储存和运输的SARS-CoV-2 RBD蛋白,本研究利用分子克隆技术构建重组植物表达载体pCAMBIA1300-RBD,再通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的水稻(Oryza sativa)遗传转化法获得T0代转基因水稻植株,以PCR检测T0~T3代水稻叶片基因组中RBD基因,最终应用qRT-PCR和Western blot鉴定RBD蛋白的转录和表达水平。结果显示,T3代成功获得2个转基因水稻纯合系,RBD蛋白在T0~T3代水稻种子中稳定表达,能与Anti-S单克隆抗体发生特异性反应。经肽N-糖苷酶F (peptide N-glycosidase F, PNGase F)处理的RBD蛋白分子量与预期大小一致,表明水稻源RBD蛋白发生N-糖基化修饰。此外,通过定量Western blot测定RBD蛋白在转基因水稻中的表达量,结果显示,RBD蛋白在转基因水稻种子中表达量最高为312 μg/g干重种子。综上,本研究获得了稳定表达SARS-CoV-2 RBD蛋白的纯合转基因植株,为进一步研制新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的水稻源亚单位疫苗提供新思路。

来源：2025年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2025年第8期