农业生物技术学报

作者：张岩, 杨帆, 曹伟军, 杜晓莉, 郑海学, 包世俊

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;2 中国农业科学院 兰州兽医研究所/兰州大学 动物医学与生物安全学院/动物疫病防控全国重点实验室/国家口蹄疫参考实验室,兰州 730000;3 甘肃省病原生物学基础学科研究中心,兰州 730046;4 西北民族大学 生命科学与工程学院,兰州 730030

关键词：塞内卡病毒(SVA),5' UTR,缺失,重组病毒,生物学特性,

基金：甘肃省科技重大专项计划(22ZD6NA001); 甘肃省杰出青年基金(21JR7RA026); 兰州大学中央高校基本科研业务费专项(lzujbky-2022-ey20); 国家生猪产业技术体系(CARS-35); 国家生猪技术创新中心项目(NCTIP-XD/C03); 西北民族大学中央高校基本科研专项资金(31920240112)

塞内卡病毒A (Senecavirus A, SVA)是属于塞内卡病毒属的小RNA病毒,感染该病毒后可引发原发性猪(Sus scrofa)的水疱病,在临床上很难与口蹄疫、猪水泡病和水疱性口炎区分。本研究成功从临床中分离鉴定了1株SVA变异毒株,发现其5' UTR存在13个核苷酸(nucleotide, nt)缺失。为了研究该缺失对SVA生物学特性的影响,本研究利用反向遗传技术,以SVA CH/FJ/2017毒株的全长cDNA感染性克隆为基础,对其基因组5' UTR序列进行定向缺失,将重组质粒转染BHK-21细胞,拯救出1株5' UTR基因缺失的塞内卡病毒rSVA-5UTRM,利用间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay, IFA)和Western blot对重组毒株进行鉴定;并将重组病毒在BHK-21细胞上连续传代,进行遗传稳定性分析;然后通过蚀斑试验和病毒生长曲线比较重组病毒与亲本毒株在BHK-21细胞上的增殖特性。结果显示,重组病毒能够与SVA抗体及SVA VP2抗体发生特异性反应,表明重组毒株拯救成功;遗传稳定性分析结果显示,5' UTR基因缺失的重组病毒传代至20代,缺失基因仍稳定存在,表明重组毒株具有良好的遗传稳定性;生物学特性分析结果表明,重组毒株与亲本毒株SVA CH/FJ/2017在BHK-21细胞上的复制特性相近,且具有较高的病毒滴度,表明5' UTR中13 nt的核苷酸缺失并不影响病毒在BHK-21细胞上的复制。本研究成功拯救出5' UTR缺失的重组SVA毒株,研究了缺失区段的功能,为阐明SVA非编码功能提供了新的科学数据。

来源：2025年第9期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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