农业生物技术学报

作者：余志鹏, 杜培岩, 张贺程, 钱文洁, 姚颖, 李柳杨, 叶国荣, 喇萍, 崔燕, 余四九, 樊江峰

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;2 甘肃省家畜胚胎工程技术创新中心,兰州 730070

关键词：牦牛,Wnt/β,-catenin信号通路,颗粒细胞,雌二醇(E2),孕酮(P4),

基金：国家自然科学基金(31660732); 甘肃省科技重点研发计划(农业类)项目(20YF8NA131); 陇原青年创新创业人才项目(2021LQGR47)

Wnt/β-catenin信号通路是由配体Wnt和细胞膜受体结合激发下游一组多通道的信号转导途径,在癌症、胚胎发育和成年动物多个生理过程的调控中发挥重要作用。为了探究Wnt/β-catenin信号通路对牦牛(Bos grunniens)卵泡颗粒细胞分泌雌二醇(estradiol, E2)和孕酮(progesterone, P4)的影响。外源性使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂SKL2001处理体外分离培养的牦牛卵泡颗粒细胞,通过细胞计数试剂盒8(Cell Counting Kit-8, CCK-8)检测细胞增殖情况,ELISA检测颗粒细胞培养上清液中雌二醇和孕酮的含量;采用qRT-PCR和Western Blot检测细胞增殖相关基因、Wnt/β-catenin信号通路相关基因和类固醇激素合成相关基因和蛋白的表达水平。结果显示,在2.5~10.0 µmol/mL范围内,外源性SKL2001能够上调牦牛卵泡颗粒细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-连环蛋白(β-catenin)、轴蛋白2相关蛋白(axin-related protein 2, Axin2)的表达,而对糖原合成酶激酶3β (glycogen synthase kinase 3β, GSK3β)的表达无影响;SKL2001显著降低颗粒细胞中增殖相关基因增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、细胞周期蛋白D2 (cyclin D2, CCND2)和细胞分裂周期蛋白42 (cell division cycle 42, CDC42)基因的表达及颗粒细胞的增殖活性;添加SKL2001能够降低培养液中雌二醇的含量,提高孕酮含量,抑制颗粒细胞雌二醇合成关键基因—细胞色素P450家族19亚家族A成员1 (cytochrome P450 family 19 subfamily A member 1, CYP19A1)和细胞色素P450 17A1 (cytochrome P450 17A1, CYP17A1)的表达,促进孕酮合成关键基因—细胞色素P450家族11亚家族A成员1 (cytochrome P450 family 11 subfamily A member 1, CYP11A1)、3β-羟基-Δ⁵-类固醇脱氢酶-Δ⁵-雄烯二醇脱氢酶1型(hydroxy-Δ⁵-steroid dehydrogenase-3β-androsten-Δ⁵-diol dehydrogenase type 1, HSD3B1)和类固醇激素合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)的表达。研究结果表明,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路后,抑制卵泡颗粒细胞增殖,并通过调控类固醇激素合成关键酶的含量,促进卵泡颗粒细胞由雌激素分泌型向孕酮分泌型转化,这可能是牦牛卵泡闭锁和黄体化的潜在机制。本研究为进一步探明牦牛卵泡颗粒细胞功能及卵泡发育调控机理积累了基础资料。

来源：2025年第9期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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