农业生物技术学报

作者：杨庭基, 包丹, 段志伟, 白文凯, 齐兴财, 赵兴绪, 贺钰烜, 董伟韬, 张勇

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070;2 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室,兰州 730070;3 甘肃农业大学 动物科学技术学院,兰州 730070

关键词：乳房炎,ARPC3/ARPC4,紧密连接,氧化应激,炎症,

基金：甘肃省青年科技基金(24JRRA657); 甘肃省教育厅青年博士支持项目(2024QB-064); 国家自然科学基金联合基金(U21A20262)

肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基3 (actin-related protein 2/3 complex subunit 3, ARPC3)和ARPC4作为调控肌动蛋白细胞骨架的重要信号分子,在炎症发展过程中对于维持上皮细胞屏障功能完整发挥重要作用。为探究ARPC3/4调控奶牛(Bos taurus)乳腺上皮细胞(mammary alveolar cells-large T antigen, MAC-T)屏障损伤与氧化应激的作用机制,本研究利用细胞计数试剂盒-8 (cell counting kit-8, CCK-8)筛选脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)和ARPC3/ARPC4抑制剂(CK666)的最适作用浓度,qPCR和Western blot技术检测核因子κB (nuclear factor kappa-B, NF-κB)信号通路、抗氧化和紧密连接相关蛋白及基因的表达。结果显示,LPS可显著提高活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量,上调髓样分化因子88 (myeloid differentiation primary response gene 88, MyD88)、Toll样受体4 (Toll-like receptor 4, TLR4)、核因子κB抑制物激酶β (inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta, IKKβ)和NF-κB的表达,下调过氧化氢酶(catalase, CAT)、超氧化物歧化酶1 (superoxide dismutase 1, SOD1)、谷胱甘肽过氧化物酶1 (glutathione peroxidase 1, GPx1)、封闭蛋白1 (claudin 1)、闭合蛋白(occludin)和闭锁小带蛋白-1 (zonula occludens-1, ZO-1)的表达。CK666处理抑制ARPC3/ARPC4后,与LPS组相比,热休克蛋白70 (heat shock protein 70, HSP70)的表达进一步上调,同时逆转了LPS导致的NF-κB、MyD88、TLR4和IKKβ表达上调,CAT、SOD1、GPx1、Claudin1、ZO-1和Occludin的表达下调,并降低了ROS含量。结果表明,奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中ARPC3/ARPC4通过破坏紧密连接使上皮细胞屏障受损,进而激活NF-κB信号通路并抑制抗氧化基因的表达,促进炎症和氧化应激的发生,表明其具有作为乳房炎治疗靶点的潜力。本研究为奶牛乳房炎的防治提供了新的思路和理论依据。

来源：2025年第9期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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