农业生物技术学报

作者：章显文, 周泷, 田欣, 陈钰, 林永强, 周菡, 吉克武作, 拉琼, 李彦敏, 张志东

单位：1 西南民族大学 畜牧兽医学院,成都 410061;2 平昌县农业农村局,平昌 636499;3 那曲市农业农村局, 那曲 852003

关键词：原核表达,N蛋白,抗体检测,猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV),化学发光免疫分析法(CLIA),

基金：国家重点研发计划(2024YFD1800503); 四川省自然科学基金(25NSFSC1122); 西南民族大学引进高层次人才科研启动金资助项目(16011211013); 西南民族大学优秀学生培养工程项目(2023NYXXS123); 成都大熊猫繁育研究基地项目(2024CPB-B16)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸道综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的母猪(Sus scrofa)繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病为主的一类急性传染病,长期严重危害我国生猪养殖业。当前我国采取以净化为主的防控方针,因此PRRSV抗体监测与野毒感染防控成为净化关键,亟待建立一种新型、快速、灵敏、低成本且全自动的PRRSV抗体检测方法。本研究基于化学发光免疫分析技术(chemiluminescence immunoassay, CLIA),通过构建重组表达质粒pET-28a-N-SUMO,原核表达重组核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白,以Western blot验证其反应原性。以纯化的重组N蛋白为抗原,建立间接的化学发光抗体检测方法,并对方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。同时,利用该方法与PRRSV商品化抗体检测间接ELISA试剂盒对收集的田间样本平行检测,以进行符合率评价。结果显示,建立的PRRSV N蛋白间接CLIA方法,待检血清OD435发光值≥13 438为阳性,与常见猪病毒抗体阳性血清无交叉反应,重复变异系数均小于7.19%,检测下限是常规ELISA商品化试剂盒的4倍,用间接CLIA法对四川和辽宁部分地区193份血清进行检测,与商品化试剂盒检测结果的Kappa值为0.924。结果表明,该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,检测时长约为35 min。本研究成功建立了基于PRRSV N重组蛋白的抗体检测间接CLIA方法,其灵敏度高,重复性好,可用于猪血清中PRRSV抗体的快速检测。本研究为为PRRSV免疫监测和疫情防控、净化提供了技术支撑。

来源：2025年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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