农业生物技术学报

作者：张燕茹, 王甜甜, 徐惠芳, 王昊, 王涵, 吴军, 李向臣, 刘波

单位：1 浙江农林大学 动物科技学院·动物医学院,杭州 311300;2 军事科学院 军事医学研究院 前沿生物技术实验室,北京 100071

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV),纳米抗体,无标签,双特异性,

中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)于2012年首次被发现,主要感染单峰骆驼 (Camelus dromedarius)和人类(Homo sapiens)。纳米抗体因其独特的优势受到关注。本研究针对MERS-CoV纳米抗体开展分子设计、工程酵母表达和制备,以及生物活性检测等研究。首先,基于前期筛选得到的Nb1和Nb2纳米抗体,通过扩增纳米抗体基因,构建单价Nb1、Nb2及双特异性Nb3真核表达载体,筛选毕赤酵母(Pichia pastoris)细胞高表达菌株。结合纳米抗体理化特性,采用亲和、离子交换及分子筛层析探索纯化工艺,制备无标签的单价及双特异性抗体。利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和生物膜干涉技术(biolayer interferometry, BLI)评估纳米抗体与抗原结合能力,并通过假病毒中和试验验证生物活性。最终获得了单价Nb1、Nb2及双特异性Nb3高纯度无标签纳米抗体,Nb3与抗原结合活性最优,最大半数有效浓度(effcient concentrations of half-maximal, EC50)为8.419 nmol/L。利用Huh-7细胞检测发现Nb2的中和活性最高,最大半数抑制浓度(inhibitory concentrations of half-maximal, IC50)为1.126 nmol/L。本研究成功制备了靶向MERS-CoV的3种纳米抗体,为纳米抗体的优化及酵母制备提供了参考,为MERS-CoV治疗性药物的开发提供了技术基础。

来源：2025年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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