农业生物技术学报

作者：索丽娟, 边坤, 李斐然, 杨超, 唐婕

单位：1 陕西省动物研究所 陕西省秦岭生态安全重点实验室,西安 710032;2 宝鸡逢春林麝工程技术研究中心, 凤县 721700;3 佛坪县林麝专家工作站,佛坪 723400

关键词：林麝,S100A8,原核表达,夹心ELISA,血清检测,

基金：陕西省重点研发计划(2025NC-YBXM-120); 陕西林业科技创新重点专项(SXLK2023-02-26); 中科院西部之光西部青年学者(XAB2021YW01)

林麝(Moschus berezovskii)作为国家一级保护动物,其雄性分泌的麝香具有重要的药用价值,而S100A8蛋白作为钙结合蛋白家族成员,在炎症反应中发挥着重要的作用。因此针对林麝人工养殖中的健康监测需求,建立S100A8双抗体夹心ELISA检测方法,实现对林麝血清样本中S100A8的检测。本研究构建pET28a-B2M原核表达载体以获取S100A8重组蛋白,通过多点注射新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)获得兔源多克隆抗体;通过杂交瘤技术,制备鼠源S100A8单克隆抗体,并将其作为捕获抗体;将辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP）标记的兔源S100A8多克隆抗体作为检测抗体,建立林麝S100A8双抗体夹心ELISA定量检测方法,对抗体浓度或稀释比、最适包被条件和孵育条件等进行优化,并采用建立的ELISA方法对31个林麝血清样本进行特异性检测。结果表明,Ni2+柱亲和层析获得重组蛋白的浓度为5 mg/mL,纯度为85%以上;间接ELISA表明,小鼠和HRP-兔抗S100A8抗体效价均高于1∶50 000。当捕获抗体浓度为4 μg/mL而检测抗体稀释比例为1∶2 000时,为最佳捕获抗体包被浓度和检测抗体工作浓度。本研究所建立的双抗体夹心ELISA方法最低灵敏度为15.625 ng/mL;可特异区分有炎症样本和正常样本。本研究成功建立双抗体夹心ELISA检测方法,实现对血清样品中S100A8蛋白的定量检测,有望应用于全面评估林麝的健康状况,并为疾病的早期诊断和治疗提供支持。

来源：2025年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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