农业生物技术学报

作者：方珍珍, 杨圆圆, 于宏, 孙学亮, 石洪玥, 陈成勋, 季延滨, 李莹莹

单位：1 农业农村部渔用药物创制重点实验室/广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室/中国水产科学研究院 珠江水产研究所,广州 510380; 2 天津农学院 水产学院/天津市水产生态及养殖重点实验室,天津 300384; 3 天津市水产研究所,天津 300202

关键词：鲤浮肿病毒(CEV),P4a蛋白,原核表达,多克隆抗体,

基金：广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室开放基金(202302); 天津市淡水养殖产业技术体系创新团队建设项目(ITTFRS2021000)

鲤浮肿病毒(Carp edema virus, CEV)是近年来流行的一种DNA病毒,严重危害着锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)和鲤(Cyprinus carpio)养殖的健康发展。本研究以鲤浮肿病毒的P4a基因组序列设计特异性引物,克隆P4a基因序列全长,再通过原核表达系统构建重组表达质粒pET-32a-P4a,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达后获得P4a重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定、纯化、复性后所得His标签融合蛋白免疫新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体,并对该抗体进行二喹啉甲酸(bicinchoninic acid assay, BCA)法浓度检测和Western blot鉴定。结果表明,本研究成功构建pET-32a-P4a原核表达载体,经NCBI Blast比对分析,载体序列与P4a蛋白理论序列同源性为99%;BCA法检测该抗体浓度为2.05 mg/mL;SDS-PAGE和Western blot鉴定显示,该抗体免疫原性良好。综上,本研究成功制备CEV P4a蛋白多克隆抗体,为CEV的免疫学检测、疫苗研发等提供了数据支持。

来源：2025年第11期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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