农业生物技术学报

作者：黄田田, 王普阳, 张桄苋, 臧冉, 袁非凡, 王淦锋, 李贤, 陈树林, 李润生, 丛日华

单位：1 西北农林科技大学 动物医学院,杨凌 712100;2 陕西省饲料工作总站,西安 710003;3 香港城市大学 赛马会兽医及生命科学学院,九龙 999077

关键词：牛,淋巴细胞活化基因3 (LAG3),生物信息学分析,原核表达,多克隆抗体,

基金：国家自然科学基金(31502028); 陕西省重点研发计划(2021KWZ-22)

淋巴细胞活化基因3 (lymphocyte activation gene 3, LAG3)作为重要的免疫调节分子,是连接免疫抑制与神经调控的潜在枢纽分子,其功能研究对揭示应激诱导的免疫-神经失衡机制具有重要意义。本研究对牛(Bos taurus) LAG3蛋白的理化性质、结构域及修饰位点等进行预测,结合基因克隆技术从牛外周血淋巴细胞cDNA中扩增LAG3胞外区编码序列,构建pET-28a-LAG3原核表达载体并转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)诱导重组蛋白表达。以镍柱亲和层析纯化的包涵体形式重组蛋白(经复性)为免疫原,免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)获得多克隆抗体。采用间接ELISA检测抗体效价,Western blot分析抗体特异性。结果显示,牛LAG3基因编码序列长1 551 bp,编码516个氨基酸,分子式为C2559H3974N728O712S11,相对分子质量56.68 kD,属亲水、非脂溶性、不稳定碱性蛋白,含1个信号肽、1个跨膜区、48个潜在磷酸化位点、3个N-糖基化位点及19个抗原表位。原核表达的重组蛋白分子量约45 kD,纯化后浓度达1.03 mg/mL。制备的多克隆抗体可与牛外周血淋巴细胞总蛋白结合,显示出大小为45 kD的单一条带,抗体效价最高达1∶1 048 576。本研究解析了牛LAG3蛋白的结构特征,成功制备了高效价、高特异性的鼠抗牛LAG3多克隆抗体,为深入研究LAG3在牛应激应答中的表达规律、亚细胞定位及免疫调控机制提供了关键工具。

来源：2025年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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