农业生物技术学报

作者：赵新, 李瑞环, 张华, 徐超, 齐欣, 陈子言, 刘娜, 王成, 兰青阔, 王永

单位：1 天津市农业科学院,天津 300384;2 农业农村部科技发展中心,北京 100176

关键词：转基因大豆'DBN9004',基因组DNA标准物质,微滴数字PCR,特性量值,不确定度,

基金：国家科技重大专项(2022ZD04020)

在转基因产品的检测方法研究与标准化、定性与定量检测、标识制度执行、安全监管过程中,转基因检测标准物质是不可或缺的重要基础。转基因大豆(Glycine max) 'DBN9004'是我国自主研发的耐除草剂大豆新品系,于2020年获得转基因生物生产应用安全证书,其安全监管和检测急需研制有证标准物质。本研究以纯合转基因大豆'DBN9004'和非转基因受体大豆'Jack'的植株叶片为原材料,冷冻研磨、提取基因组DNA后,按DBN9004/Lectin拷贝数比值分别为100%和3%的比例,称量配制得到不同梯度含量的转基因大豆'DBN9004'基因组DNA标准物质DBN9004a和DBN9004c,每个浓度的标准物质各分装500管。运用微滴数字PCR方法,根据《标准物质定值的通用原则及统计学原理》(JJF 1343)对2种浓度标准物质进行标准物质均匀性评估、稳定性评估、联合定值数据的处理及不确定度评定。结果表明,2种标准物质均匀性检验的F值均小于临界值F0.05(14,30(2.04),在单元内和单元间具有良好的均匀性;在37 ℃以下可以稳定储存和运输10 d,在-20 ℃条件下长期稳定性达到9个月、反复冻融10次;9家实验室联合测定的标准物质拷贝数浓度和比值无异常值、呈正态分布、且等精度。标准物质DBN9004a和DBN9004c 的转化体特异性序列拷贝数浓度的量值及扩展不确定度分别为(4.43±0.38)×104和(6.32±0.65)×102 copies/μL,DBN9004转化体/Lectin拷贝数比值的量值及扩展不确定度分别为(98.1±9.8)%和(3.08±0.32)%。研制的转基因大豆'DBN9004'梯度含量基因组DNA标准物质均匀性良好,可稳定运输和储存,满足转基因大豆'DBN9004'定性、定量检测需求,为转基因大豆'DBN9004'的安全监管、定量标识制度的实施提供了可靠的有证标准物质。

来源：2025年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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