农业生物技术学报

作者：徐佳靖, 王换换, 马畅, 陈希文, 王公民, 刘颖, 张源淑

单位：南京农业大学 动物医学院/农业农村部动物生理生化重点实验室,南京 210095

关键词：血管紧张素转化酶2 (ACE2),非酒精性脂肪肝病(NAFLD),小干扰RNA (siRNA)干扰,氧化应激,炎性反应,

基金：国家自然科学基金(30871838)

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一种以肝脏中产生大量脂质沉积为特征,严重危害人类健康的慢性肝脏疾病。近年来,宠物和农场动物脂肪肝病的发病率逐渐增加,这对养殖业造成了严重的经济损失。血管紧张素转化酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)已被证明对脂肪肝等多种疾病具有抗炎、抗损伤和抗纤维化的正向调控作用。本课题组前期研究发现,ACE2可能对外源性刺激诱导的NAFLD发挥一定的抗损伤作用,但其确切的保护机制尚不明确。本研究首先通过0.025~0.200 mmol/L油酸(oleic acid, OA)诱导大鼠(Rattus norvegicus)正常肝脏间质(BRL-3A)细胞24 h,建立NAFLD细胞模型,并检测肝细胞损伤指标,明确合适的诱导条件。然后通过添加外源ACE2活性蛋白或小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)干扰处理,染色观察脂质沉积,检测总抗氧化能力(total anti-oxidative capacity, T-AOC)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)和炎性因子等变化。Western blot检测细胞ACE2、Mas受体(mas receptor, MasR)的蛋白表达;ELISA检测细胞上清液中血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)和Ang 1-7的含量,明确ACE2对NAFLD细胞损伤的保护作用。结果显示：1)成功建立了NAFLD细胞模型,经油红染色分析,检测肝细胞甘油三酯(triglyceride, TG)含量以及活性氧(reactive oxygen species, ROS)等的变化,选定NAFLD细胞模型诱导条件为0.100 mmol/L油酸作用24 h,确定OA低、中、高(0.025, 0.100和0.200 mmol/L) 3种不同浓度进行后续实验;2)与对照组相比,高浓度OA处理组细胞ACE2蛋白表达显著下调(P<0.05),低、中浓度组ACE2表达无明显差异;添加ACE2活性蛋白处理组细胞ACE2与MasR表达水平显著升高(P<0.05),转染siRNA-ACE2后,ACE2表达水平则显著降低(P<0.05),MasR表达水平降低但差异不显著;3)中浓度OA处理,ACE2和MasR表达上调,Ang 1-7和Ang Ⅱ水平增高,脂质堆积增多,氧化应激加重,抗氧化能力减弱,炎性因子和NO含量极显著升高(P<0.01),iNOS活性极显著增强(P<0.01),抗炎因子含量极显著降低(P<0.01);4)与OA处理组相比,添加ACE2活性蛋白组细胞ACE2、MasR和Ang 1-7水平显著或极显著上调(P<0.05或P<0.01),Ang Ⅱ水平下调。细胞内相对脂滴面积和TG含量显著减少(P<0.05),同时,ALT、AST活力和T-AOC均有不同程度的增强,氧化应激与炎性反应减轻。转染siRNA-ACE2处理后逆转了以上变化。研究结果提示,在NAFLD细胞模型中,使用ACE2活性蛋白处理能缓解细胞脂质沉积,减轻细胞氧化应激和炎性反应,对OA诱导的大鼠肝细胞NAFLD有一定缓解作用,其机制主要是通过降解Ang Ⅱ激活Ang 1-7/Mas,并通过作用于NO/iNOS信号通路实现的。本研究从细胞水平揭示了ACE2缓解NAFLD的机制,为将ACE2发展为治疗NAFLD的潜在新靶点提供了重要的理论依据。

来源：2025年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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