农业生物技术学报

作者：胡荣斌, 吴兴凤, 潘志洪, 李莉, 何逸懿, 徐娥

单位：贵州大学 动物科学学院 动物营养与饲料研究所/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,贵阳 550025

关键词：硒蛋白W (SELW),重组慢病毒载体,猪,骨骼肌卫星细胞,

基金：国家自然科学基金(31860648)

硒蛋白W (selenoprotein W, SELW)是骨骼肌中重要的硒蛋白之一,对细胞分化等多种生物学功能具有重要作用,为探究SELW基因对猪(Sus scrofa)骨骼肌卫星细胞分化的影响。选取3头7日龄健康的大白猪,采集心、肝、脾、肺、肾、背肌、腿肌7个组织样提取RNA,qPCR检测SELW基因在不同组织中的相对表达量。运用在线软件对猪SELW蛋白质进行生物信息学分析。克隆猪SELW基因(GenBank No. NM_213977) CDS全长序列,构建过表达SELW基因重组慢病毒载体并感染骨骼肌卫星细胞,嘌呤霉素筛选获得SELW稳定表达细胞系,通过亚细胞定位确定SELW蛋白的表达部位,qPCR和Western blot检测SELW基因及蛋白的表达水平。收集诱导分化0和48 h的细胞样,qPCR检测配对盒子3基因(paired box 3, PAX3)、PAX7、肌源性因子5基因(myogenic factor 5, MYF5)、生肌决定因子基因(myogenic determinant, MYOD)、肌细胞生成素基因(myocyte generating factor, MYOG)的表达量。结果表明,SELW基因在猪7个不同组织中均有表达,在心脏和背肌中表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。SELW蛋白分子式为C421H677N109O119S3Se1,相对分子质量为9 344.81 D,理论等电点为9.15,属于稳定蛋白质。遗传进化分析可知猪SELW基因与人(Homo sapiens)、恒河猴(Macaca mulatta)、苏门答腊猩猩(Pongo abelii)相似性最高。亚细胞定位结果表明,SELW蛋白定位于细胞核和细胞质。qPCR和Western blot检测SELW过表达效率,SELW-OE组表达量极显著高于SELW-NC组(P<0.01),表明SELW基因稳定表达细胞系构建成功。qPCR结果表明,诱导分化0 h时SELW-OE组的PAX7和MYF5基因的表达量极显著上调,而MYOD基因表达量显著下调(P<0.05),MYOG基因的表达量极显著下调(P<0.01);诱导分化48 h后PAX3基因的表达量显著上调(P<0.05),PAX7、MYF5、MYOD和MYOG基因的表达极显著上调(P<0.01),表明SELW基因过表达后可促进与骨骼肌细胞分化相关基因的表达。本研究为进一步探讨SELW基因对猪肌肉生长发育的分子调控机制提供基础资料。

来源：2024年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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