农业生物技术学报

作者：付环茹, 赵敏, 江锦秀, 陈翠腾, 张靖鹏, 李兆龙, 万春和

单位：1 福建省农业科学院 畜牧兽医研究所,福州 350013; 2 福建农林大学 生命科学学院,福州 350002; 3 福建省禽病防治重点实验室/福建省畜禽遗传育种重点实验室/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州 350013

关键词：鹅圆环病毒(GoCV),ORF3蛋白,原核表达,间接ELISA,流行病调查,

基金：财政部和农业农村部 国家现代农业产业技术体系(水禽)(CARS-42-18); 福建省科技计划(2020J06029; 2020R1026009; 2021R1026001; 2021R1026006; 2023R1076; 2023R1077); 福建省农业科学院科技计划(CXPT202108; CXTD2021005-1)

鹅圆环病毒(Goose circovirus, GoCV)是一种潜在的免疫抑制病原,主要感染宿主淋巴细胞,导致免疫功能下降,易造成其他病原继发感染,给养鹅(Anser cygnoides orientalis)业带来极大危害。为建立鹅圆环病毒血清学抗体的间接ELISA方法,本研究将GoCV的ORF3基因插入到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-ORF3,经表达条件优化,以Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析表明,获得的重组ORF3蛋白具有良好的生物学活性。以纯化后的重组ORF3蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件建立了GoCV间接ELISA抗体检测方法。优化后的间接ELISA检测条件为：重组ORF3蛋白的最佳包被浓度为2.00 μg/mL、待检血清稀释度为1∶80、酶标二抗最佳稀释度分别为1∶4 000 (羊抗鸡HRP-IgG)和1∶8 000 (羊抗鸭HRP-IgG)。采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)、鹅源禽坦布苏病毒(Avian tembusu virus, ATmV)、鹅源H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenza virus, AIV)、鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus, GRV)、新型鹅星状病毒(Goose astrovirus, GoAstV)、GoCV等鹅源阳性血清进行检测,结果显示,仅GoCV阳性血清为阳性结果,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,特异性较强;重复性较好,批内和批间变异系数均小于5%。流行病学调查结果显示,福建和广东地区鸭(Anatinae)群中均存在GoCV跨种感染。本研究建立的检测GoCV血清抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性好,可用于GoCV感染的诊断及流行病学调查研究。

来源：2024年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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