农业生物技术学报

作者：黄玲巍, 杨迪, 靳莉武, 杨雅雯, 王家敏, 乔自林, 阿依木古丽•阿不都热依木

单位：1 西北民族大学 生物医学研究中心/细胞基质疫苗关键技术与产业化教育部工程研究中心,兰州 730030; 2 西北民族大学 生物医学研究中心/甘肃省动物细胞技术创新中心,兰州 730030; 3 西北民族大学 生命科学与工程学院,兰州 730030; 4 西北民族大学 实验教学部,兰州 730030; 5 西北民族大学 生物医学研究中心/生物工程与技术国家民委重点实验室,兰州 730030

关键词：MDCK细胞,miR-2779-x,生长特性,靶基因,

基金：甘肃省教育厅高校教师创新基金(2023B-058); 中央高校基本科研业务费资金专项(31920230001)

犬肾细胞系MDCK (Madin Darby Canine Kidney)是生产流感病毒疫苗最常用的细胞系之一,miR-2779-x作为非编码RNA能够抑制MDCK细胞的自发肿瘤转化。本研究基于慢病毒系统构建过表达及敲低miR-2779-x的稳转细胞株,利用细胞增殖检测试剂盒CCK-8 (Cell Counting Kit-8)、细胞凋亡和细胞周期检测试剂盒以及细胞划痕试验、软琼脂克隆试验对稳转细胞株进行检测。结果显示,miR-2779-x过表达使细胞增殖能力和相对迁移率显著降低(P<0.01)、侵袭能力增加(P<0.01),敲低细胞株的结果与之相反;过表达细胞株的早期凋亡率显著提高(P<0.01),敲低细胞株的晚期凋亡率显著提高(P<0.01);miR-2779-x过表达使细胞在S期发生阻滞,敲低细胞株在G0/G1期发生阻滞。半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose, TCID50)检测结果显示,转入过表达及敲低miR-2779-x慢病毒的MDCK细胞对甲型H1N1流感病毒株的敏感性无显著变化。通过qRT-PCR和Western blot验证miR-2779-x靶基因的表达变化,发现多个与转化致瘤和生长相关的基因受到miR-2779-x负调控,推测靶基因CASP9 (caspase 9)可能作为凋亡通路因子与PI3K/AKT信号通路共同调控MDCK细胞增殖。本研究为建立新型MDCK细胞系提供了新思路,可为流感疫苗生产提供更好的细胞基质。

来源：2024年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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