农业生物技术学报

作者：冯桂丹, 闫若潜, 马震原, 柴茂, 周建浩, 康台生, 王淑娟, 杨海波, 刘影, 谢彩华, 赵雪丽, 王翠

单位：1 河南农业大学 动物医学院,郑州 450002; 2 河南省动物疫病预防控制中心,郑州 450008; 3 河南省重大动物疫病监测预警与防控重点实验室,郑州 450008; 4 上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103; 5 河南科技大学 动物科技学院,洛阳 471000

关键词：猪α,干扰素,猪白细胞介素-2,嵌合基因,可溶性表达,体外活性,

基金：河南省重点研发专项(231111111300); 河南省重大科技专项(221100110600); 河南省现代农业产业技术体系(HARS-22-12-T); 河南省科技攻关项目(232102110089)

猪(Sus scrofa) α干扰素/白细胞介素-2 (porcine interferon α/porcine interleukin-2, PoIFN-α-linker-PoIL-2)在大肠杆菌(Escherichia coli)中多以包涵体形式表达,为在大肠杆菌系统中获得可溶性表达的具有活性的重组猪α干扰素/白介素2 (rPoIFN-α-linker-PoIL-2)蛋白,本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因进行可溶性改造并合成。将改造后的PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因克隆到表达载体pET-32a(+)进行原核表达,采用镍铬亲和层析柱对表达的可溶性rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白进行纯化。分别采用淋巴细胞增殖检测法、ELISA方法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白体外促猪外周血T淋巴细胞(peripheral blood T lymphocyte, PBLC)增殖活性,及其与抗猪白介素2单抗、抗猪α干扰素单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在不同细胞系上抑制不同病毒的增殖活性。结果显示,PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因可在大肠杆菌中高效可溶性表达,表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白分子量大小约55 kD。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白经镍铬亲和层析柱纯化后纯度达90%以上。rPoIFN-α-linker-PoIL-2具有显著的促PBLC增殖活性(P<0.05);可以与抗PoIL-2、PoIFN-α单抗发生特异性免疫反应。rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在不同细胞上抑制不同病毒的增殖活性效价有差异,在猪肾细胞(porcine kidney cells, PK)-15、人羊膜细胞(human amniotic cells) WISH上抑制水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus, VSV)增殖的活性单位分别为1.8×106和2.5×106 IU/mg;在PK-15细胞上抑制伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)、塞内卡病毒(Seneca virus A, SVA)增殖的活性单位分别为2.2×104、1.3×105 IU/mg;在非洲绿猴肾细胞(Verda Reno, Vero)上抑制猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)增殖的活性单位为3.2×104 IU/mg。本研究获得了可溶性表达的rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白,该蛋白在不同细胞上具有抑制VSV、PRV、SVA及PEDV等病毒增殖的活性,为进一步研究rPoIFN-α-linker-PoIL-2蛋白在猪体内的活性提供了基础资料。

来源：2024年第3期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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