农业生物技术学报

作者：张玉琎, 吉军, 肖鑫, 张静怡, 王利琴, 高燕燕, 田宇航, 张明生

单位：1 贵州大学 生命科学学院/山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室,贵阳550025;2 贵州医科大学 药学院,贵阳 550025

关键词：杜鹃兰,共生萌发,非共生萌发,qRT-PCR,内参基因,

基金：国家自然科学基金面上项目(32270311); 贵州省山地农业关键核心技术攻关项目(GZNYGJHX-2023011); 贵州省科技计划重大专项课题(黔科合平台人才[2017]5411-06); 国家喀斯特石漠化防治工程技术研究中心建设项目(2012FU125X13); 贵州省中药材现代产业技术体系建设项目(GZCYTX-02)

杜鹃兰(Cremastra appendiculata)为兰科珍稀药用植物,因其具有较高的药用价值而获得广泛关注。由于存在严重的繁殖障碍,加之人类的掠夺式采挖,导致其资源濒临枯竭,利用现代生物分子技术解决杜鹃兰物种繁殖困难的问题是资源保护的有效途径之一。本研究以杜鹃兰不同器官(根, 茎和叶)和不同萌发阶段的种子(共生萌发和非共生萌发种子)为材料,采用qRT-PCR技术检测肌动蛋白(β-actin, ACT)、翻译延伸因子(translation elongation factor 1 beta, ef-1β)、亲环蛋白(cyclophilin, CYP)、核糖体蛋白(ribosomal protein, RPL)、核糖体蛋白S8 (ribosomal protein S8, RPS)、泛素C (ubiquitin C, UBC)、微管蛋白(α-tubulin, TUB)共计7个常用管家基因的表达情况,并结合geNorm、NormFinder和BestKeeper软件对候选基因的稳定性进行综合评价,根据分析结果筛选适于杜鹃兰qRT-PCR的内参基因;并通过目的基因赤霉素氧化酶基因(GA 3-beta dioxygenase, GA3ox)和凝集素蛋白编码基因10 (lectin protein coding gene 10, Lectin10)对内参基因的稳定性进行验证。研究发现,在杜鹃兰不同处理条件和不同组织下均可引入双内参基因进行实验;在不同器官中,RPL和ef-1β的表达相对一致,稳定性较好,适合作为内参基因;在不同萌发阶段的共生萌发种子中,UBC和TUB表达最为稳定,而不同萌发阶段的非共生萌发种子中最稳定的内参基因为RPL和ef-1β。分别选择相对稳定的UBC和TUB作为内参基因时,目的基因GA3ox和Lectin10在不同萌发阶段的共生杜鹃兰种子中相对表达变化趋势基本一致,而稳定性较差的ACT并没有对目的基因的表达分析进行有效校正,其数据出现明显偏差。本研究为不同研究条件下杜鹃兰相关基因的表达分析提供了校正和标准化基因,有效提高了后续研究的准确性和可靠性。

来源：2024年第4期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2024年第4期