农业生物技术学报

作者：卢炳州, 茹毅, 郝荣增, 李亚军, 杨洋, 杨锐, 毛玉涵, 蒋成辉, 陶世宇, 郑海学, 余四九, 崔燕

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070; 2 中国农业科学院 兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州 730046

关键词：铁蛋白纳米颗粒,口蹄疫病毒(FMDV),中和表位,T细胞表位,免疫原性,

基金：甘肃省重点人才项目(2022RCXM016); 中国农业科学院兰州兽医研究所所级基本科研业务费(1610312021013; 1610312022009)

蛋白纳米颗粒能够在表面展现多拷贝抗原,模拟病毒的结构形态,更有利于免疫细胞摄取和促进抗原递呈,从而增强疫苗保护效力。本研究旨在利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统制备展示口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)优势中和表位的铁蛋白纳米颗粒,并评估其免疫原性。首先以幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)铁蛋白序列为基础,将FMDV优势中和表位序列插入铁蛋白第33和34位氨基酸之间,同时将耶尔森氏菌属(Yersinia) T细胞表位序列插入铁蛋白氨基酸序列的氨基末端,构建具有铁蛋白序列、B细胞表位(优势中和表位)和T细胞表位的重组表达质粒pET28a-FBT,以仅插入铁蛋白序列的重组质粒pET28a-Fer作为对照。将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞,经诱导表达和分子筛层析纯化获得目的蛋白,利用SDS-PAGE、Western blot、粒径分析和透射电镜进行鉴定,进一步免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)评价免疫原性。结果显示,利用大肠杆菌表达系统成功制备的铁蛋白纳米颗粒FBT可与FMDV阳性血清发生特异性反应;FBT免疫14 d即产生血清抗体,并持续升高,在免疫35 d中和抗体效价最高可达1∶128;同时,FBT免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖水平和白介素2 (interleukin 2, IL-2)、IL-4、IL-10、干扰素-γ (interferon-γ, IFN-γ)分泌水平显著高于对照组(P<0.05)。本研究制备了展示FMDV中和表位且具有良好免疫原性的铁蛋白纳米颗粒,为新型口蹄疫基因工程疫苗的研制提供技术支持。

来源：2024年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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