农业生物技术学报

作者：潘晓欣, 崔明珠, 罗亚如, 孙静, 程昌勇, 王晶, 宋厚辉

单位：浙江农林大学 动物科技学院•动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室,杭州 311300

关键词：减毒李斯特菌,宫颈癌,免疫治疗,载体疫苗,

基金：浙江省自然科学基金(LY23C180002); 国家自然科学基金(31972648; 32172849),浙江省属高校基本科研业务费专项资金(2020KJ004); 宁波市公益类科技项目(2022S006)

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种能在细胞间迁徙繁殖并能促进抗原特异性CD4+和CD8+ T细胞增殖产生适应性细胞免疫的优质候选疫苗活载体。本课题组发现新型减毒李斯特菌(attenuated Listeria monocytogenes, LAM)较野生型李斯特菌的溶血能力和增殖能力均显著降低的同时仍可正常分泌李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O, LLO)蛋白。为了研究LAM的安全性及其对宫颈癌特异性抗原E7蛋白的递送与免疫效果,本研究在小鼠(Mus musculus)模型上检测了LAM的毒力,并对LAM-E7重组菌株在小鼠宫颈癌免疫治疗和预防中的作用进行了评价。结果显示,LAM对小鼠的毒力是野生型李斯特菌毒力的1/8709,且小鼠脏器中的LAM可在一周内被清除。本研究通过同源重组的方法将E7基因整合到LAM基因组上,PCR鉴定结果显示,LAM-E7菌株构建成功。Western blot结果显示,E7蛋白能够与LLO在重组菌株中融合表达并释放。通过对LAM-E7的体外生长能力和溶血活性分析发现,融合后对LAM的生长能力和溶血能力无显著影响,表明E7蛋白的融合不会影响LAM的安全性。通过腹部皮下注射方式构建小鼠宫颈癌模型发现,LAM-E7组小鼠肿瘤平均体积(161.1202 mm3)显著小于LAM组(349.4625 mm3)和PBS组(512.4149 mm3)(P<0.01),说明接种LAM-E7对肿瘤生长具有显著的抑制作用。经免疫预防试验发现,LAM-E7组小鼠肿瘤平均体积(3.86 mm3)显著小于LAM组(172.67 mm3)和PBS组(57.38 mm3)(P<0.001),表明LAM-E7对宫颈癌有一定的预防效果。本研究证实LAM-E7对小鼠宫颈癌具有良好的治疗和预防效果,为减毒李斯特菌作为疫苗载体用于宫颈癌治疗提供了新的思路,也为今后宫颈癌治疗疫苗的研发提供数据支持。

来源：2024年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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