农业生物技术学报

作者：宋嘉仪, 张海霞, 齐是, 张纪利, 陈东豪, 韦建玉, 黎平, 陈泽鹏, 颜健

单位：1 华南农业大学 资源环境学院,广州 510642; 2 广东烟草韶关市有限公司,韶关 512026; 3 广西中烟工业有限责任公司,南宁530001; 4 中国烟草总公司广东省公司,广州 510642

关键词：菌核青霉,SYBR Green Ⅰ,绝对定量,

基金：广东省烟草专卖局(公司)科技项目(粤烟科项202203); 广西中烟有限责任公司产学研科技项目(GXZYCX2020B006)

菌核青霉(Penicillium sclerotiorum)是青霉属中一种具有很高生物活性的内生真菌,其产生的次级代谢产物具有一定的生物防治潜力,已在医学、农业等领域有广泛的应用。本研究以马齿苋(Portulaca oleracea)植株中分离纯化而来的菌核青霉为材料,针对其特异性保守序列设计引物,将目的片段通过分子克隆技术连接至pBM73-T载体中构建重组质粒为阳性标准品,选用SYBR GreenⅠ染料法建立菌核青霉实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,PCR扩增后只有菌核青霉产生条带,青霉属的波兰青霉(P. chrysogenum)和产黄青霉(P. polonicum)均无条带产生,且未检测到其熔解曲线和扩增曲线,说明该方法具有很强的特异性。以重组质粒作为标准品构建的标准曲线,其循环阈值(Ct)与模板浓度在2.35×103~2.35×1010 copies/μL间有良好的线性关系,所得到的标准曲线为y=-3.211x+39.42,相关系数R2=0.999 3,组内和组间变异系数均低于5%。土壤样品检测结果表明,该方法可以灵敏地检测到环境样本中的菌核青霉及其数量,具有较好的应用潜力。本研究建立的方法具有良好的特异性、重复性及实用性,可用于探究菌核青霉在植株和土壤中的定殖情况,量化植物不同组织及土壤中菌核青霉数量。本研究为菌核青霉促生及抗性机制研究提供一定的数据和理论支持。

来源：2024年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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