农业生物技术学报

作者：赵佳福, 李永, 周明帅, 温晓艳, 陆情梅, 刘彬

单位：贵州大学 高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/动物科学学院,贵阳 550025

关键词：LncRNA-牛磺酸上调基因(LncRNA-TUG1),miR-31-5p,前列腺癌,22Rv1,细胞增殖,细胞迁移,

基金：贵州省科学技术基金(黔科合基础[2020]1Y085)

酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白ε (tyrosine 3-monooxygenase/tryptophan 5-monooxygenase activating protein ε, YWHAE)在前列腺癌(prostate cancer, PCa)中高表达,miR-31-5p可靶向调控YWHAE的表达影响前列腺癌细胞的增殖。但是,参与miR-31-5p对YWHAE靶向调控的长链非编码RNA (long non-coding RNA, LncRNA)目前尚不明确。本研究根据前人研究结果及生物信息学分析软件筛选出LncRNA-牛磺酸上调基因(LncRNA-tauronic upregulation, LncRNA-TUG1)、LINC02604和PDCD6IP-DT 3条LncRNAs能靶向调控miR-31-5p的表达。通过RT-qPCR检测3条LncRNAs在前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、22Rv1及正常前列腺基质永生化细胞(WPMY-1)中的表达,筛选调控miR-31-5p/YWHAE轴的最佳LncRNA;RT-qPCR检测干扰LncRNA-TUG1及过表达miR-31-5p对22Rv1细胞中LncRNA-TUG1、miR-31-5p和YWHAE表达的影响;同时,通过CCK-8、细胞划痕实验检测共转染sh-TUG1及miR-31-5p mimics对22Rv1细胞增殖和迁移的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、B细胞淋巴瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2, BCL-2)、Bcl-2相关X蛋白(BCL2-associated X, BAX)和半胱氨酸蛋白酶-3 (cysteine proteinase-3, Caspase-3)表达的影响。结果表明,LncRNA-TUG1、LINC02604和PDCD6IP-DT为调控miR-31-5p/YWHAE轴的3条LncRNAs,且与正常细胞相比,LncRNA-TUG1在PCa各细胞系中高表达,尤其在22Rv1细胞中的表达量最高。以LncRNA-TUG1为研究对象,分别转染sh-TUG1及miR-31-5p mimics到22Rv1细胞后,qPCR结果显示,与NC mimics组相比,转染miR-31-5p mimics组中miR-31-5p的表达量极显著上调(P<0.01),LncRNA-TUG1和YWHAE基因的表达显著下调(P<0.05);与sh-NC组相比,转染sh-TUG1组中miR-31-5p的表达无显著变化,LncRNA-TUG1的表达显著下调(P<0.05),YWHAE基因的表达极显著下调(P<0.01);CCK-8及细胞划痕实验表明,共转染sh-TUG1及miR-31-5p mimics后,能够显著抑制细胞增殖及迁移;Western blot结果表明,共转染sh-TUG1及miR-31-5p mimics能够显著抑制PCNA、BCL-2/BAX蛋白的表达,促进caspase-3蛋白的表达。以上结果说明,LncRNA-TUG1可通过调节miR-31-5p/YWHAE来调控PCNA、BCL-2、BAX和caspase-3蛋白的表达,进而影响22Rv1细胞的增殖。本研究为前列腺癌症靶向药物的开发提供理论参考和实验思路。

来源：2024年第5期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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