农业生物技术学报

作者：徐铮, 李振诚, 赖威仲, 许博, 钱雨玉, 陈晨, 王晶, 张勇, 冯冲, 魏彦明

单位：1 甘肃农业大学 动物医学院,兰州 730070; 2 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室,兰州 730070; 3 苏州启辰生物科技有限公司,苏州 215400

关键词：比格犬,转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN),视网膜色素上皮65 (RPE65),基因编辑,视网膜,

基金：国家自然科学基金(32060812); 甘肃省高校产业支撑项目(2020C-14); 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室经费资助(20JR10RA563)

视网膜色素上皮65 (retinal pigment epithelium 65, RPE65)基因在视循环中起重要作用,当RPE65基因发生突变时,视锥、视杆细胞功能丧失,严重的患者会视力丧失。为构建RPE65基因突变动物疾病模型,本研究利用转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)基因编辑技术,以比格犬(Canis lupus familiaris)为实验动物,针对RPE65基因第3号和第7号外显子构建表达载体,结合显微操作创建RPE65基因编辑犬。通过临床观察、常规眼科检查、眼底照相(fundus photography, FP)、光学相干断层扫描(optical coherence tomography, OCT)和全视野视网膜电图(electroretinography, ERG)对幼犬视功能进行表型分析检测。T7E1酶切和基因测序结果显示,最终获得2只RPE65基因编辑雄性幼犬。眼科表型分析表明,RPE65基因编辑幼犬眼底血管稀疏纤细;ERG结果显示,光感受器细胞的电位活动a波、b波振幅降低,峰时延长,提示视网膜功能受损。本研究利用TALEN基因编辑技术构建的RPE65基因编辑幼犬存在视功能障碍,可为RPE65基因突变诱导的视网膜疾病及相关研究提供参考,还为治疗手段的开发、临床药物的筛选提供良好的动物疾病模型。

来源：2024年第6期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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