农业生物技术学报

作者：许立琼, 史雨红, 陈炯

单位：1 宁波大学 农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室,宁波 315211;2 宁波大学 海洋学院 生物化学与分子生物学实验室,宁波 315211;3 宁波大学 海洋学院 水产生物技术教育部重点实验室, 宁波 315832

关键词：白细胞衍生趋化因子(LECT2),双抗体夹心ELISA法(DAS-ELISA),香鱼,初步应用,

基金：浙江省自然科学基金(LY22C190003); 宁波市自然科学基金(2021J115)

白细胞衍生趋化因子(leucocyte cell-derived chemotaxin 2, LECT2)的表达量对鱼类健康状态具有指示作用。本研究利用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达香鱼(Plecoglossus altivelis)重组PaLECT2蛋白(recombinant PaLECT2, rPaLECT2),分别免疫小鼠(Mus musculus)和新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus)制备抗血清,再用Protein G亲和层析柱纯化获得抗体。以小鼠抗PaLECT2抗体作为捕获抗体以及辣根过氧化酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的兔抗PaLECT2抗体作为检测抗体,通过条件优化建立双抗体夹心酶联免疫吸附法(double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay, DAS-ELISA)。最后应用该方法检测嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染香鱼的模型和抗生素治疗的预后模型中血清PaLECT2蛋白含量。研究结果显示,小鼠和HRP-兔抗PaLECT2抗体效价分别为1∶12 800和1∶25 600。当捕获抗体浓度为8 μg/mL而检测抗体稀释比例为1∶1 600时,为最佳捕获抗体包被浓度和检测抗体工作浓度。所建DAS-ELISA法的最低检测限为11.22 ng/mL,具有良好的特异性和重复性。应用本方法测得感染组中PaLECT2的含量为(412±31.5) ng/mL,极显著高于健康组(54±7.2) ng/mL (P<0.001),而治疗组中PaLECT2的含量为(225±56.1) ng/mL,极显著低于感染组(P<0.01)。综上,本研究为PaLECT2蛋白表达水平的定量检测提供了一种更加快捷、标准化的方法,有望应用于香鱼健康状况诊断和监测。

来源：2024年第7期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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