农业生物技术学报

作者：赵正婷, 盖晓彤, 张俊蕾, 夏振远, 刘弟, 刘雅婷, 姜宁

单位：1 云南省烟草农业科学研究院,昆明 650021; 2 云南农业大学 农学与生物技术学院,昆明 650201; 3 云南农业大学 植物保护学院,昆明 650201; 4 云南农业大学 烟草学院,昆明 650201

关键词：云南烟草曲叶病毒(TbLCYnV),外壳蛋白(CP)基因,环介导等温扩增(LAMP),特异性,灵敏度,

基金：国家自然科学基金(32260681); 云南省烟草公司科技计划项目(2021530000242031); 云南省科技厅基础研究专项(202101AU070129)

云南烟草曲叶病毒(Tobacco leaf curl Yunnan virus, TbLCYnV)是在中国云南保山烟草(Nicotiana tabacum)上发现的菜豆金色花叶病毒属新病毒,是云南烟草曲叶病的重要病原之一。为快速检测TbLCYnV,本研究根据TbLCYnV的外壳蛋白(coat protein, CP)基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)反应温度、时间,体系中甜菜碱、dNTPs、Mg2+的体积摩尔浓度、内外引物比等进行逐一优化,同时与传统PCR平行对比以验证LAMP的特异性和灵敏度,应用田间采集样品验证LAMP体系的实用性,确立了TbLCYnV的LAMP检测最佳体系。结果表明,最佳引物组为TbL-5,最适反应温度为60 ℃,甜菜碱、dNTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为1.0、0.4和4.0 mmol/L,最佳内外引物浓度比为4∶1,最佳反应时间60 min。检测结果显示优化后的LAMP经SYBR GreenⅠ染色可通过肉眼直接判断结果,具有高度特异性,且灵敏度是常规PCR的10 000倍。本研究为TbLCYnV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法,对于TbLCYnV的早期快速诊断和防控具有重要意义。

来源：2024年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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