农业生物技术学报

作者：林忠森, 赵勤, 袁建林, 伍锐, 颜其贵, 文翼平, 黄小波, 杜森焱, 曹三杰

单位：四川农业大学 动物医学院/猪病研究中心/国家级动物类实验教学示范中心/农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站, 成都 611130

关键词：成纤维细胞生长因子受体样因子1 (FGFRL1),重组多杀性巴氏杆菌毒素(rPMT),Hela细胞,细胞增殖,PI3K-AKT通路,

基金：四川省“十四五”川猪重大科技专项(2021ZDZX0010); 中央引导地方科技发展专项(2021ZYD0086)

成纤维细胞生长因子受体样因子1 (fibroblast growth factor receptor-like 1, FGFRL1)作为成纤维细胞生长因子受体家族成员,在调控细胞增殖、分化上起作用。多杀性巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin, PMT)是多杀性巴氏杆菌(P. multocida, Pm)产生的重要毒力因子,属于一种促有丝分裂原蛋白,在多种细胞上引起细胞增殖,导致组织增生、占位,使其他正常组织细胞生存受限而死亡,但目前PMT引起促增殖作用的机制以及介导的因子均不清晰。前期CRISPR/Cas9全基因文库筛选发现FGFRL1提高了重组PMT (recombinant PMT, rPMT)蛋白染毒处理的Hela细胞存活率。为探究PMT在Hela细胞上的促增殖作用是否通过FGFRL1介导,本研究分别使用0、0.01、0.1、1.0 μg/mL的rPMT蛋白处理正常及FGFRL1基因缺失的Hela细胞各48 h,CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法检测细胞增殖率、EdU-488标记法检测细胞DNA复制情况、划痕试验法检测增殖细胞的迁移率。结果显示,在rPMT浓度为0.1 μg/mL处理48 h时,缺失FGFRL1的Hela细胞增殖显著下降(P<0.05),而划痕恢复率与正常Hela细胞相比下降接近70% (P<0.05)。说明FGFRL1的缺失减弱了rPMT对Hela的促增殖作用。利用实时荧光定量PCR检测rPMT处理后Hela细胞 磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/serine-threonine protein kinase, PI3K-AKT)通路上游因子变化水平、Western blot检测该通路关键激活因子AKT的磷酸化水平进行初步验证。结果显示：rPMT处理后PI3K-AKT通路上游因子转录水平显著升高(P<0.05),缺失FGFRL1的Hela细胞AKT与磷酸化AKT水平极显著低于正常Hela细胞(P<0.01),说明PI3K-AKT通路激活受到抑制。由此可以初步确认PMT可能通过FGFRL1靶向PI3K-AKT通路引起Hela细胞增殖。本研究丰富了PMT促增殖作用的理论基础,初步探索了PMT引起细胞增殖的通路激活方式,为进一步揭示PMT的促增殖作用提供参考。

来源：2024年第8期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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