农业生物技术学报

作者：唐冕耀, 赵勤, 石艳萍, 曹玉琴, 文翼平, 伍锐, 杜森焱, 黄小波, 颜其贵, 曹三杰

单位：1 四川农业大学 动物医学院/猪病研究中心,成都 611130; 2 四川农业大学 国家级动物类实验教学示范中心,成都 611130; 3 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站,成都 611130

关键词：乙型脑炎病毒(JEV),囊膜蛋白(E),I176R位点突变,神经毒力致弱,生物学特性,

基金：国家自然科学基金(31972722)

乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)是一种危害严重的人畜共患病毒,囊膜蛋白(envelope protein, E)对JEV的神经毒力起关键作用。前期研究发现,重组乙型脑炎病毒(recombinant Japanese encephalitis virus, rJEV)囊膜蛋白I176R位点突变可致弱其神经毒力。为鉴定rJEV-EI176R位点突变后其生物学特性的变化,本研究克隆分析了E176位点突变重组病毒rJEV-EI176R的E基因序列和E蛋白的生物信息学特征;利用qPCR、蚀斑试验和间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)等技术测定rJEV-EI176R的生长曲线、对多种细胞的吸附差异和rJEV-EI176R诱导小鼠小胶质细胞系(mouse microglia cell line, BV-2)细胞炎性水平差异。结果显示,rJEV-EI176R的E蛋白带正电荷的残基增加1个,等电点升高0.37,不稳定指数升高0.39;E蛋白的α螺旋、β折叠、延伸链以及无规则卷曲的数量及占比均发生了改变,同时E176位点氨基酸与附近氨基酸有了不同的连接;rJEV-EI176R在BV-2细胞上的生长曲线没有显著变化且能够感染不同来源的神经细胞和肾细胞;rJEV-EI176R的吸附能力显著提高(P<0.05)但蚀斑大小变化不显著;rJEV-EI176R接种BV-2细胞后,在12和24 h均引起肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、干扰素γ诱导蛋白-10 (interferon-gamma-induced protein-10, IP-10)的水平显著低于亲本株(P<0.05)。本研究丰富了JEV毒株E蛋白的生物学特性研究,为后期深入研究JEV减毒机制和疫苗研发提供基础资料。

来源：2024年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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