农业生物技术学报

作者：马克姣, 蔡清清, 王佳兴, 王强州, 白皓, 陈世豪, 常国斌

单位：1 扬州大学 表观遗传学与表观基因组学研究所,扬州 225009; 2 扬州大学 兽医学院,扬州 225009

关键词：鸡,甲基胞嘧啶双加氧酶2 (TET2),功能域,真核表达载体,先天免疫,

基金：国家自然科学基金(32002271); 国家肉鸡产业技术体系(CARS-41)

甲基胞嘧啶双加氧酶2 (ten-eleven translocation 2, TET2)通过甲基化依赖和不依赖的两种方式调控哺乳动物的天然免疫反应,而鸡(Gallus gallus) TET2的先天免疫调控作用尚未阐明。本研究旨在克隆鸡TET2基因并构建TET2及截短体的真核表达载体,初步探讨TET2及其功能域对鸡先天免疫反应的影响。根据鸡TET2基因组(GenBank No. NM_001277794.1)信息,克隆其全长CDS序列。将TET2全长分为N端N1126和C端CD两个截短体,扩增其基因片段,将其同源重组连接至pCAGGS-Myc真核表达载体。将重组质粒pCAGGS-Myc-TET2及截短体分别转染至鸡胚成纤维细胞DF-1中,通过Western blot和免疫荧光检测鸡TET2及截短体的蛋白表达和细胞定位。通过qRT-PCR检测过表达pCAGGS-Myc-TET2及截短体基因对ploy (I:C)诱导的先天免疫反应相关基因表达的影响。PCR结果显示,成功克隆鸡TET2全长序列及其截短体N1126和CD。生物信息学分析表明,与鸡TET2亲缘关系最为相似的是鸿雁(Anser cygnoides)和绿头鸭(Anas platyrhynchos)。Western blot检测表明,Myc标签融合的TET2全长和截短体均能在DF-1细胞正常表达。免疫荧光检测表明,鸡TET2定位于细胞核。qRT-PCR结果表明,过表达鸡TET2全长及截短体均能显著促进poly(I:C)诱导的黑色素瘤分化相关基因5 (melanoma differentiation associated gene 5, MDA5)和三基序蛋白25 (tripartide motif containing 25, TRIM25)的表达(P<0.05),而对干扰素调节因子7 (interferon regulatory factor 7, IRF7)的表达无显著影响(P>0.05);与过表达截短体N1126相比,过表达TET2全长和CD功能域极显著促进poly(I:C)诱导的β干扰素(interferon-β, IFN-β)表达(P<0.05)。本研究初步探索了TET2及其截短体对鸡先天免疫反应的影响,为鸡TET2调控先天免疫反应的分子机制提供了基础信息。

来源：2024年第10期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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