农业生物技术学报

作者：王明, 山清影, 张晶晶, 杜坤

单位：1 扬州大学 生物科学与技术学院,扬州 225009; 2 扬州大学 生命科学基础实验教学中心,扬州 225009

关键词：甘蓝型油菜,PHO2 (PHOSPHATE2),泛素结合酶,原核表达,

基金：国家自然科学基金(32172019; U20A2028); 江苏省高等教育教改研究课题(2021JSJG029)

PHO2 (PHOSPHATE2)作为磷转运蛋白的负调控因子,通过行使其泛素结合酶活性在植物体内磷的代谢平衡中发挥作用。本研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana) PHO2为基础,探究甘蓝型油菜(Brassica napus)中与之同源性最高的BnaPHO2蛋白特性及其功能。以生物信息学数据为参考,对BnaPHO2基因表达模式、亚细胞定位以及酵母自激活活性进行分析,并利用原核表达系统获得BnaPHO2融合蛋白。结果显示,BnaPHO2蛋白由865个氨基酸组成,分子量为95.7 kD,蛋白理化特性稳定;保守结构区域含有与泛素蛋白和泛素连接酶共价结合的位点;在系统发育上与同科的白菜(Brassica rapa)和甘蓝(Brassica oleracea)的亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示,BnaPHO2基因在油菜的根、叶等营养器官中的相对表达量较高,且积极响应高磷胁迫。烟草(Nicotiana tabacum)瞬时转化结果显示,BnaPHO2定位于细胞膜和细胞核。酵母自激活检测表明,BnaPHO2全长无自激活活性。在28 ℃下经1 mmol/L IPTG 诱导16 h后,分别获得N端融合6×His标签和C端融合谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase, GST)标签的BnaPHO2纯化蛋白。BnaPHO2蛋白特性的阐明及异源蛋白的表达为后续开展体外互作、泛素化等研究提供理论参考和基础资料。

来源：2024年第11期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2024年第11期