农业生物技术学报

作者：梁力丹, 李华君, 兰玉菲, 臧西哲, 林嘉龙, 韦勇琪, 张佩锦, 任鹏飞, 孟丽

单位：1 山东农业大学 植物保护学院/山东省农业微生物重点实验室,泰安 271018; 2 山东省农业科学院 农业资源与环境研究所/农业农村部废弃物基质化利用重点实验室,济南 250100; 3 泰安市农业科学院,泰安 271000

关键词：荷叶离褶伞,内参基因,实时荧光定量PCR,稳定性,

基金：山东省重点研发计划项目(2022CXGC010610; 2022LZGC023); 山东省食用菌产业技术体系(SDAIT-07-06)

选择合适的内参基因是qRT-PCR的关键步骤,但关于荷叶离褶伞(Lyophyllum decastes)内参基因的筛选研究还尚未见报道。本研究以荷叶离褶伞的不同后熟时间(45, 55和65 d)、子实体不同发育时期(原基, 幼菇, 子实体)和不同菌盖形态(正常, 畸形)为实验材料,选择在食用菌研究中6个常用的基因：细胞色素c氧化酶亚基1 (cytochrome c oxidase subunit 1, Cox1)、ATP酶(ATPase)、葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase, PGI)、蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A, PP2A)、DNA指导的RNA聚合酶亚基2 (DNA-directed RNA polymerase subunit 2, Rpb2)和泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme, UBC),以及4个鲜有报道的基因：含TCP1伴侣蛋白亚基-2 (chaperonin containing TCP1, subunit 2, CCT2)、细胞色素b560亚基(cytochrome b560 subunit, Cyb)、羟基类固醇17-β-脱氢酶3 (17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 3, HSD17B3)和铜/锌超氧化物歧化酶(copper/zinc superoxide dismutase, SODC)作为候选内参基因,并借助ΔCt、geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder五种算法程序评估10个候选内参基因的表达稳定性,并以β-1, 3葡聚糖酶为目的基因验证本研究筛选的内参基因。结果表明,HSD17B3在不同后熟时间和不同发育时期表达最稳定,Rpb2在不同菌盖形态中表达最稳定,而PP2A在不同后熟时间和不同菌盖形态中均最不稳定,在不同发育时期中,PGI的表达稳定性最差。本研究评估了荷叶离褶伞内参基因的稳定性,为荷叶离褶伞不同时期以及不同菌盖形态的研究提供参考。

来源：2024年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

查看农业生物技术学报杂志2024年第12期