农业生物技术学报

作者：卢秋巍, 王媛媛, 辛宇轩, 董夙轩, 邓海燕, 郭富烨

单位：忻州师范学院 生物系,忻州 034000

关键词：藜麦,内参基因,冷,旱,脱落酸(ABA),qPCR,

基金：山西省基础研究计划(20210302124502)

实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR, qPCR)是研究基因转录水平调控的常用方法,但其准确性依赖于合适的内参基因对数据进行归一化处理。为筛选出冷、旱胁迫及脱落酸(abscisic acid, ABA)、氟啶酮(fluridone, FLU)(ABA抑制剂)处理下藜麦(Chenopodium quinoa)中稳定表达的内参基因,本研究采用GeNorm、Normfinder、BestKeeper、ΔCt法和RefFinder等5种统计工具对9个候选内参基因进行评估。结果表明,冷、旱胁迫下的最佳内参基因为三磷酸鸟苷酶3 (GTPase 3, GTP638)和26S蛋白酶体(26S proteasome, PRN483);ABA和氟啶酮处理下的最佳内参基因为PRN483和二肽基羧肽酶(dipeptidyl carboxypeptidase, DCP894);冷、旱胁迫及ABA、氟啶酮处理下的最佳内参基因为泛素结合酶E2 (ubiquitin-conjugating enzyme E2, UBC822)和PRN483;管家基因肌动蛋白(β-actin, ACT878)在冷、旱胁迫及ABA、氟啶酮处理下的稳定性最差。利用9-顺式-环氧胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase, NCED185)和氧化还原酶(oxidoreductase, OXI802)基因表达模式验证候选内参基因的可靠性,结果显示,以UBC822或PRN483为内参基因时,NCED185和OXI802具有相似的表达模式,均表现出对冷、旱胁迫及ABA、氟啶酮处理的响应;以ACT878为内参基因时,NCED185和OXI802没有表现出对不同处理的响应。本研究为藜麦基因表达分析提供了适合的内参基因,为开展相关分子机制研究提供了技术支持。

来源：2024年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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