农业生物技术学报

作者：纪晓霞, 吴雨龙, 陈希文, 周潇, 杜欣雨, 张源淑

单位：1 南京农业大学 农业部动物生理生化重点开放实验室,南京 210095; 2 南京晓庄学院 食品科学学院,南京 211171

关键词：白羽肉鸡,血管紧张素转化酶2 (ACE2),原核表达,重组蛋白,多克隆抗体,

基金：国家自然科学基金(31972640); 江苏省高校自然科学研究重大项目(20KJA416003)

血管紧张素转换酶2 (angiotensin-converting enzyme 2, ACE2)可作为多种病理生理过程的保护剂和调节剂,以及人冠状病毒的功能性受体,但在鸡(Gallus gallus domesticus)中的研究尚未见报道。本研究以白羽肉鸡为研究对象,首先通过PCR扩增ACE2基因编码区,与原核表达载体pET32a连接,构建鸡ACE2原核表达体系。然后以异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导ACE2蛋白表达并优化诱导条件,确定其表达方式。氯化钾(KCl)染色切胶纯化获得的鸡ACE2重组蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达蛋白的特异性和分子量,管式凝胶等电聚焦(isoelectric focusing polyacrylamide gel electrophoresis, IEF-PAGE)确定其等电点(pI)。以该纯化的ACE2重组蛋白作为抗原免疫大鼠(Rattus norvegicus)制备鸡ACE2多克隆抗体,测定其效价,并对其特异性等进行验证,利用该抗体明确鸡体内ACE2的组织分布和细胞学定位。结果显示,成功构建了鸡pET32a-ACE2原核表达体系,目的蛋白最佳表达条件为1 mmol/L IPTG诱导10 h,以包涵体形式存在;获得了具有良好抗原性和特异性的鸡ACE2重组蛋白,分子量约为105 kD,pI为5.01;成功获得了具有较好特异性的鼠抗鸡源ACE2多克隆抗体,抗体效价为1∶12 800;明确在白羽肉鸡心脏、肝脏、肺脏、肾脏、腺胃、十二指肠、回肠、盲肠、空肠、直肠、睾丸组织中均有ACE2的分布表达,本研究为ACE2在鸡中的进一步研究提供了实验依据和资料。

来源：2024年第12期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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