农业生物技术学报

作者：李金峰, 袁建林, 赵勤, 杜森焱, 伍锐, 文翼平, 黄小波, 颜其贵, 曹三杰

单位：1 四川农业大学 动物医学院/猪病研究中心,成都 611130;2 四川农业大学 国家级动物类实验教学示范中心,成都 611130;3 农业部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站,成都 611130

关键词：重组多杀性巴氏杆菌毒素(PMT),猪细胞,细胞毒性,小鼠病理模型,

基金：四川省“十四五”川猪重大科技专项(2021ZDZX0010); 中央引导地方科技发展专项(2021ZYD0086)

多杀性巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin, PMT)作为多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)最重要的毒力因子之一,危害生猪健康,造成巨大经济损失。为鉴定重组多杀性巴氏杆菌毒素(Recombinant Pasteurella multocida toxin, rPMT)对4种猪细胞的毒性并构建其小鼠(Mus musculus)毒性病理模型。本研究构建pColdⅠ-toxA载体并可溶性表达rPMT;通过形态学观察、细胞增殖毒性(cell counting kit-8, CCK-8)检测及钙黄绿素/碘化丙啶(calcein/propidium iodide)染色探究rPMT对PK15等4种猪细胞的毒性。运用寇氏(Karber)法测定rPMT对C57BL/6J小鼠的半数致死剂量(the median lethal dose, LD50),并对rPMT攻毒后小鼠的心、肝、脾、肺、肾、小肠进行组织病理学分析。结果显示,rPMT蛋白(146 kD)表达于上清;rPMT处理4种猪细胞后,PK15细胞形态变化最明显,细胞死亡较多,细胞活性显著降低(P<0.05),而IPEC细胞活性显著升高(P<0.05);rPMT对C57BL/6J小鼠的LD50为0.490 ng/g (rPMT/体重);攻毒后小鼠肠绒毛脱落,肾脏、肝脏充血严重,脾脏红髓区脾窦出血、淋巴细胞数量减少并伴有大量色素沉积。本研究鉴定发现rPMT对4种猪细胞中的PK15毒性作用最大并成功构建了rPMT对C57BL/6J小鼠的毒性病理模型,为深入研究PMT的致病机制提供了理论基础。

来源：2023年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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