农业生物技术学报

作者：邬旭龙, 肖璐, 杨苗, 谢礼, 安微, 郭杨, 张琴, 王印, 林华

单位：1 成都农业科技职业学院 动物疫病检测中心,成都 611130;2 四川省畜牧科学研究院 动物遗传育种四川省重点实验室,成都 610066;3 成都海关技术中心 食品安全检测四川省重点实验室,成都 610041;4 四川农业大学 动物医学院,成都 611130

关键词：液相芯片,高通量,猪繁殖障碍疫病,临床检测,

基金：成都农业科技职业学院科研基金项目(22ZR203); 海关总署科研项目(2020HK141); 四川省重点研发项目(2021YFS0002)

随着我国养猪业的发展和进步,对于疾病的鉴别诊断和大数据分析提出了更高的要求和目标。为建立一种同时检测7种猪(Sus scrofa)繁殖障碍性疫病的方法,促进高通量检测技术在动物病原检测中的发展和应用,本研究针对猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)、猪日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus, PPV)、非洲猪瘟病毒(African classical swine fever virus, ASFV) 7种猪繁殖障碍性疫病病原,设计特异性引物、探针,经反应条件优化、探针与微球偶联和杂交捕获反应,成功建立1种同时检测7种猪疫病的液相芯片检测方法,并将该方法进行临床应用。结果显示,微球与探针偶联效率较高,在液相环境中能实现对特异性目的基因捕获检测,该方法检测灵敏性较高,可同时检测到7种特异性病原的最低检测限度为103 copies/μL;该方法检测特异性好,与猪其他常见病原无交叉反应,重复性试验中组内和组间检测数据一致性较强。利用建立的方法对临床采集四川规模化猪场疑似发病的65份样品和ASFV阳性对照核酸进行检测和验证,共检出49份阳性样品,阳性率达75.38% (49/65),混合感染检出阳性率为23.08% (15/65),经单重PCR复检后结果一致,证实建立的液相芯片检测方法可应用于临床检测。本研究为猪病多种病原快速鉴别诊断提供有力的技术储备,同时为高通量检测技术的进一步发展提供参考。

来源：2023年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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