农业生物技术学报

作者：张传美, 崔燕蕾, 温力森, 于永乐, 单虎, 杨海燕

单位：青岛农业大学 动物医学院,青岛 266109

关键词：肉食兽,转铁蛋白受体(TfR),TaqMan荧光定量PCR,细小病毒,

基金：2021年山东省专业学位研究生教学案例库(SDYAL21174); 青岛农业大学2020年专业学位研究生教学案例库建设项目(QNYAL2002); 青岛农业大学2021年大学生创新创业训练项目

转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)是一种位于细胞膜上的Ⅱ型跨膜二聚体糖蛋白,是犬(Canis lupus familiaris)、猫(Felinae)等肉食动物细小病毒(Carnivorous parvovirus)侵入宿主细胞的受体。为了建立一种检测肉食兽TfR基因表达的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对肉食兽不同组织和传代细胞中的TfR基因表达进行检测分析。本研究参考GenBank中公布的犬、猫的TfR胞外区蛋白基因序列设计合成1对引物和1条特异性TaqMan探针,优化qPCR的反应体系和条件,构建阳性质粒,建立标准曲线,进行敏感性、重复性检验,并使用建立的方法对肉食兽不同组织和传代细胞中的TfR基因表达水平进行了检测分析。结果表明,本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法线性关系良好,相关系数为0.998 7;敏感性高,最低检测浓度为67 copies/µL;重复性好,批内和批间评价实验变异系数均小于2.0%。本研究建立了一种检测肉食兽TfR的qPCR方法,敏感性和重复性好,可用于肉食兽不同组织和传代细胞中TfR基因表达的检测。

来源：2023年第1期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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