农业生物技术学报

作者：于志勇, 刘萌萌, 姚枭洋, 胡学远, 接金磊, 迟良, 刘焕奇

单位：1 青岛农业大学 动物医学院,青岛 266109; 2 青岛农业大学 巴瑟斯未来农业学院,青岛 266109; 3 青岛市智慧乡村发展服务中心,青岛 266100

关键词：CRISPR/Cas9,胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R),小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),载体构建,

基金：山东省现代农业产业技术体系创新团队项目(SDAIT-09-05)

胰岛素样因子1型受体(insulin-like growth factor 1 receptor, IGF-1R)基因在哺乳动物的生长发育和代谢中发挥着重要作用。本研究通过Gibson无缝链接(Gibson assembly)和重叠延伸PCR (genes plicing by overlap extension PCR, SOE PCR),利用pSMART LCKan载体将向导RNA (small guide RNA, sgRNA)插入lentiCRISPR v2质粒进行改造,构建IGF-1R基因敲除载体,通过菌液PCR、双酶切、基因测序对敲除载体进行评估;将该载体转染至小鼠(Mus musculus)胚胎成纤维细胞中,通过Western blot比较敲除组和对照组细胞IGF-1R蛋白表达量。结果表明,IGF-1R基因敲除载体构建成功;敲除组细胞IGF-1R蛋白表达量极显著降低(P<0.01),表明成功敲除了小鼠胚胎成纤维细胞中IGF-1R基因。本研究改进了CRISPR/Cas9敲除系统表达载体的构建过程,为进一步在细胞层次研究IGF-1R基因的作用机制提供有力工具。

来源：2023年第2期

《农业生物技术学报》期刊编辑部

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